Ključna razlika između BCA i Bradfordovog testa je u tome što je BCA test dugotrajan i manje precizan, dok je Bradfordov test brz i točan.
BCA i Bradfordov test dvije su metode određivanja koncentracije proteina. Ova dva testa imaju različite principe testa i razlike u njihovoj točnosti.
Što je BCA test?
BCA test ili test bicinhoninske kiseline biokemijski je test koristan za određivanje ukupne koncentracije proteina u otopini. Ova metoda je također nazvana kao Smithov test po svom izumitelju, Paulu K. Smithu. Ova analitička metoda pokazuje sličnosti s Lowryjevom analizom proteina, Bradfordovom analizom proteina ili biuretnim reagensom. Ukupnu koncentraciju proteina u određenom uzorku možemo promatrati kroz promjenu boje otopine uzorka, koja prelazi iz zelene u ljubičastu. Ova promjena boje događa se proporcionalno sadržaju proteina. Nakon toga možemo upotrijebiti kolorimetrijsku tehniku za analizu intenziteta boje i sadržaja proteina u uzorku.
BCA metoda procjene proteina
Kada se uzme u obzir mehanizam BCA testa, tipična BCA otopina sadrži visoko alkalnu otopinu s pH od gotovo oko 11,25, a sastojci u ovoj otopini uključuju bicinhoninsku kiselinu, natrijev karbonat, natrijev bikarbonat, natrijev tartarat i bakrov(II) sulfat pentahidrat. Ovaj test prvenstveno ovisi o dvjema kemijskim reakcijama: redukciji bakra(II) u bakar(I) pomoću peptidnih veza u proteinu i keliranju dviju molekula bicinhoninske kiseline s bakrovim(I) ionom, što rezultira ljubičasto obojenim kompleksom koji može apsorbiraju svjetlost na valnoj duljini od 562 nm. U prvoj reakciji, količina bakra(II) reducirana peptidnim vezama proporcionalna je količini proteina u uzorku.
Što je Bradfordov test?
Bradfordov test je spektroskopska analitička metoda korisna u mjerenju koncentracije proteina u otopini. Ovu je metodu razvila Marion M. Bradford 1976. godine i ona je relativno brza i precizna metoda.
Reakcija boje proteina i Bradfordovog reagensa
Ovu metodu možemo koristiti za određivanje koncentracije količine proteina u uzorku. Kemijska reakcija koja se odvija u uzorku tijekom ovog testa isključivo ovisi o aminokiselinskom sastavu proteina u uzorku.
Bradfordova metoda procjene proteina
Kada se uzme u obzir metoda ovog testa, radi se o kolorimetrijskom testu proteina koji se temelji na pomaku apsorbancije boje pod nazivom Coomassie Brilliant Blue G-250. Općenito, ova boja postoji u tri oblika: anionski (plavi), neutralni (zeleni) i kationski (crveni). Zbog toga u kiselim uvjetima boja mijenja boju iz crvene u plavu. To je zbog vezanja proteina s bojom. Nasuprot tome, ako nema proteina koji bi se vezao s bojom, promjena boje se ne pojavljuje, otopina dobiva crveno-smeđu boju. Ova boja je sposobna formirati jak, nekovalentan kompleks s karboksilnom skupinom proteina putem Van der Waalovih sila i elektrostatskog privlačenja.
Koja je razlika između BCA i Bradfordovog testa?
BCA i Bradfordov test dvije su metode određivanja koncentracije proteina. Ova dva testa imaju različite principe testa i razlike u njihovoj točnosti. Ključna razlika između BCA i Bradfordovog testa je u tome što je BCA test dugotrajan i manje točan, dok je Bradfordov test brz i točan.
Sljedeća infografika sažima razlike između BCA i Bradfordovog testa u obliku tablice.
Sažetak – BCA vs Bradfordov test
BCA test ili test bicinhoninske kiseline biokemijski je test koristan za određivanje ukupne koncentracije proteina u otopini. Bradfordov test je spektroskopska analitička metoda korisna u mjerenju koncentracije proteina u otopini. Ključna razlika između BCA i Bradfordovog testa je u tome što je BCA dugotrajan i manje precizan, dok je Bradfordov test brz i točan.
