Ključna razlika – HPLC naspram HPTLC
Ključna razlika između HPLC i HPTLC je u tome što HPLC omogućuje kvantitativno odvajanje komponenata u uzorku, dok HPTLC ne dopušta kvantitativno odvajanje komponenata u uzorku.
Kromatografija je metoda fizičke separacije koja se koristi za odvajanje i identifikaciju komponenti u smjesi. I HPLC i HPTLC su kromatografske tehnike. HPLC je tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti. HPTLC je tankoslojna kromatografija visoke učinkovitosti.
Što je HPLC?
HPLC je tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti. To je analitička tehnika koja se koristi za odvajanje, identifikaciju i kvantificiranje komponenti u smjesi. U ovoj tehnici, uzorak se otapa u prikladnom otapalu. Zatim se otapalo s uzorkom propušta kroz pumpu sa zadanim tlakom. Crpka je napunjena čvrstim upijajućim materijalom. Zatim se neke komponente snažno vežu za upijajući materijal, dok se druge komponente vežu labavo. Zbog toga komponente imaju različite brzine protoka kroz pumpu. Stoga se komponente mogu lako odvojiti.
Slika 01: HPLC sustav
Upijajući materijal koji ispunjava pumpu poznat je kao stacionarna faza. Otapalo s otopljenim uzorkom poznato je kao mobilna faza. Pumpa koja se koristi u ovoj tehnici naziva se kolona. Kolona je ispunjena adsorpcijskim materijalom, najčešće česticama silicija. Veličina ovih čestica može biti u rasponu od 2-50 μm. Na proces odvajanja utječu sastav mobilne faze i temperatura sustava. Interakcije između stacionarne faze i komponente u uzorku mogu biti hidrofobne interakcije, dipol-dipol interakcije, ionske veze itd.
Radni tlak HPLC-a znatno je viši nego kod tradicionalne tekućinske kromatografije. Leži oko 50-350 bara. Razlika između tekućinske kromatografije i HPLC je u tome što u tekućinskoj kromatografiji uzorak pada kroz stupac pod utjecajem gravitacije, dok je u HPLC-u uzorak pod pritiskom kroz stupac. Veličina stupca i upijajućih čestica također su vrlo male u usporedbi s tradicionalnom tekućinskom kromatografijom. Međutim, rezolucija koju daje HPLC tehnika je bolja.
Što je HPTLC?
HPTLC je tankoslojna kromatografija visoke učinkovitosti. To je napredni i automatizirani oblik tradicionalnog TLC-a. Ova tehnika omogućuje učinkovito rješavanje problema u kratkom vremenskom razdoblju. U ovoj metodi analize uzorak i referenca mogu se analizirati istovremeno, što omogućuje usporedbu uzorka s referencom. Daje poboljšanu analitičku točnost od drugih kromatografskih tehnika. Vrijeme potrebno za analizu je manje. Tehnika je jeftina tehnika.
Slika 02: Analiza prehrambenih boja pomoću HPTLC
HPTLC metoda je jednostavan proces, a korak pripreme uzorka također je eliminiran (u tradicionalnoj TLC, korak pripreme uzorka uključen je prije odvajanja. Ovaj korak uključuje čišćenje i obogaćivanje). Otapalo se može koristiti izravno bez prethodne obrade iako druge kromatografske tehnike zahtijevaju prethodnu obradu kao što su otplinjavanje, filtracija itd.
Upijajući materijal koji se koristi u HPTLC je silicij s vrlo malim veličinama čestica. U tradicionalnoj TLC, veličina čestica silicijevog dioksida je 5-20 μm, dok je u HPTLC 4-8 μm. Uzorak se nanosi na HPTLC ploču pomoću aplikatora. Omogućuje jednoliku i sigurnu primjenu. Zatim se ploče stavljaju u komoru s mobilnom fazom. Komora treba biti zasićena parama mobilne faze. Nakon HPTLC procesa mogu se otkriti mrlje koje su se pomaknule. Prilikom otkrivanja mrlja na ploči, HPTLC tehnika koristi odgovarajuće UV područje ili jodnu komoru.
Koja je razlika između HPLC i HPTLC?
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC je tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti. | HPTLC je tankoslojna kromatografija visoke učinkovitosti. |
| Tehnika | |
| U HPLC-u, mobilna faza s otapalom prolazi kroz kolonu napunjenu stacionarnom fazom. | U HPTLC, uzorak se stavlja na TLC ploču i stavlja u komoru koja sadrži mobilnu fazu; tada je uzorku dopušteno migrirati uz ploču zajedno s mobilnom fazom. |
| Mjerenje | |
| U HPLC-u, razlike između brzina protoka komponenti kroz kolonu koriste se za odvajanje komponenti u uzorku. | U HPTLC-u, razlike između prijeđenih udaljenosti svake komponente u uzorku koriste se za odvajanje komponenti u uzorku. |
| Kvantitativno odvajanje | |
| HPLC omogućuje kvantitativno odvajanje komponenti u uzorku. | HPTLC ne dopušta kvantitativno odvajanje komponenti u uzorku. |
Sažetak – HPLC naspram HPTLC
HPLC i HPTLC dvije su kromatografske tehnike. Ključna razlika između HPLC i HPTLC je u tome što HPLC dopušta kvantitativno odvajanje komponenata u uzorku, dok HPTLC ne dopušta kvantitativno odvajanje komponenata u uzorku.
