Ključna razlika FPLC i HPLC je u tome što je FPLC vrsta tekućinske kromatografije koja pročišćava velike biomolekule kao što su proteini, nukleotidi i peptidi, dok je HPLC vrsta tekućinske kromatografije koja odvaja spojeve male molekularne težine.
Tekućinska kromatografija je tehnika koja se koristi za razdvajanje uzorka na pojedinačne komponente. Ovo odvajanje nastaje zbog interakcije specifičnih uzoraka s pokretnom i stacionarnom fazom. Komponente unutar uzorka odvajaju se na temelju afiniteta svake komponente prema mobilnoj fazi u tekućinskoj kromatografiji. Kako mobilna faza i uzorak prolaze kroz kolonu, komponente uzorka se počinju razdvajati u trake koje se mogu detektirati UV-VIS spektroskopijom. Stoga su FPLC i HPLC dvije vrste tehnika tekućinske kromatografije.
Što je FPLC?
FPLC je vrsta tekućinske kromatografije koja pročišćava velike biomolekule kao što su proteini, nukleotidi i peptidi. Brzu proteinsku tekuću kromatografiju (FPLC) prva je razvila i plasirala na tržište u Švedskoj tvrtka Pharmacia 1982. Često se koristi za analizu ili pročišćavanje proteinskih smjesa. To se odvija na temelju principa afiniteta komponenti uzorka prema pokretnoj tekućini (mobilna faza) i poroznom čvrstom materijalu (stacionarna faza). U FPLC, mobilna faza je pufer, a stacionarna faza je smola sastavljena od kuglica. Obično se sastoji od umrežene agaroze pakirane u cilindrični stakleni ili plastični stupac.
Slika 01: Aparat FLPC (brza proteinska tekuća kromatografija)
U većini FLPC strategija koristi se smola za ionsku izmjenu. Stoga će se protein od interesa vezati za smolu interakcijom naboja. FLPC tehnika također koristi dva pufera: pufer 1 (tekući pufer) i pufer 2 (elucijski pufer). U početku, kada pufer i smjesa uzorka prolaze kroz kolonu, protein od interesa u smjesi će se vezati na smolu interakcijom naboja. Ali protein od interesa postaje disociran i vraća se u otopinu u puferu za ispiranje kada pufer za ispiranje prođe kroz kolonu na kraju procesa. Kasnije, otopina (eluant koji sadrži protein od interesa) prolazi kroz dva detektora, koji mjere koncentraciju soli i koncentraciju proteina. Kako se svaki protein eluira, pojavljuje se kao "vrh" tijekom detekcije i može se prikupiti za daljnju upotrebu.
Što je HPLC?
HPLC je vrsta tekućinske kromatografije koja odvaja spojeve male molekularne težine. Godine 1969., prvi HPLC komercijalno je proizveo Waters Corporation, SAD. U tekućinskoj kromatografiji visoke učinkovitosti (HPLC), smjesa uzorka (analit) u otapalu (mobilna faza) pumpa se kroz kolonu s kromatografskim materijalom za pakiranje (stacionarna faza) pod visokim tlakom. Mješavina uzorka nosi pokretna struja plina nosača helija ili dušika.
Slika 02: HPLC (tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti)
Komponente u mješavini uzorka koje imaju najmanju količinu interakcije sa stacionarnom fazom ili najveću količinu interakcije s mobilnom fazom izaći će iz kolone brže. S druge strane, komponente u mješavini uzorka koje imaju najveću količinu interakcije sa stacionarnom fazom ili najmanju količinu interakcije s mobilnom fazom će izaći iz kolone sporije. Na temelju gore navedenog principa interakcije, komponente smjese uzorka mogu se odvojiti. Štoviše, instrument detektor identificira svaku komponentu mješavine uzorka koja izlazi iz kolone. HPLC se koristi za provjeru okoliša i bioloških uzoraka na prisutnost ili odsutnost poznatih spojeva, kao što su lijekovi, toksini ili pesticidi. Koristi se u različitim industrijama poput farmaceutske, okolišne, forenzičke i kemijske.
Koje su sličnosti između FPLC i HPLC?
- FPLC i HPLC su vrste tekućinske kromatografije.
- Oboje se koristi za odvajanje i identifikaciju bioloških uzoraka.
- Imaju tekuću mobilnu fazu i čvrstu stacionarnu fazu.
- Obje tehnike koriste stupac za prolaz kroz uzorak.
- Ove tehnike koriste pumpe, detektore, ventile i softver za odvajanje i detekciju uzorka.
Koja je razlika između FPLC i HPLC?
FPLC je vrsta tekućinske kromatografije koja se koristi za pročišćavanje velikih biomolekula kao što su proteini, nukleotidi i peptidi. HPLC je vrsta tekućinske kromatografije koja se koristi za odvajanje spojeva male molekularne težine. Dakle, ovo je ključna razlika između FPLC i HPLC. Štoviše, FPLC koristi monitore pH i vodljivosti kao i kolektore frakcija. Nasuprot tome, HPLC ne koristi monitore pH i vodljivosti i kolektore frakcija.
Infografika u nastavku navodi više razlika između FPLC i HPLC u tabličnom obliku.
Sažetak – FPLC vs HPLC
Kromatografija je laboratorijska analitička tehnika koja se koristi za odvajanje komponenti iz smjese. Dijeli se na nekoliko tipova kao što su kolonska kromatografija, plinska kromatografija, tekućinska kromatografija, kromatografija ionske izmjene itd. FPLC i HPLC dvije su vrste tehnika tekućinske kromatografije. FPLC je vrsta tekućinske kromatografije koja se koristi za pročišćavanje velikih biomolekula kao što su proteini, nukleotidi i peptidi. S druge strane, HPLC je vrsta tekućinske kromatografije koja se koristi za odvajanje spojeva male molekularne težine. Dakle, ovo je sažetak razlike između FPLC i HPLC.
