Ključna razlika između RP HPLC i HIC je u tome što RP HPLC koristi polarniju mobilnu fazu i manje polarnu stacionarnu fazu. Dok HIC koristi hidrofobnu stacionarnu fazu koja omogućuje hidrofobnim molekulama da se vežu za nju.
Kromatografija je analitička tehnika koja pomaže razdvojiti smjesu na komponente. Prvo moramo otopiti uzorak koji treba razdvojiti u otopinu. Ova mješavina otopine i tvari naziva se mobilna faza. Zatim se mobilna faza propušta kroz drugi materijal koji se naziva stacionarna faza. Stacionarna faza određuje razdvajanje komponenti. Do odvajanja dolazi zbog podjele materijala između mobilne faze i stacionarne faze.
Što je RP HPLC?
Izraz RP HPLC označava tekućinsku kromatografiju visoke učinkovitosti reverzne faze. Uključuje razdvajanje komponenti u smjesi, prema hidrofobnosti. Hidrofobne komponente u mobilnoj fazi povezuju se s imobiliziranim hidrofobnim ligandima na stacionarnoj fazi, dok hidrofilne komponente eluiraju kroz stacionarnu fazu bez vezivanja za površinu stacionarne faze.
Slika 01: HPLC aparat
Štoviše, ova metoda ima veću reproducibilnost u usporedbi s drugim kromatografskim tehnikama, a pokazuje i široku primjenjivost. Stoga ovu metodu koristimo u laboratorijima za više od 75% svih HPLC metoda. Većinu vremena kao mobilnu fazu koristimo vodenu mješavinu vode s polarnim organskim otapalom koje se može miješati. Tako će osigurati pričvršćivanje hidrofobnih komponenti u otopini na površinu stacionarne faze.
Što je HIC?
Izraz HIC je kratica za hidrofobnu interakcijsku kromatografiju. To je vrsta HPLC reverzne faze, a ova se metoda uglavnom koristi za odvajanje velikih biomolekula poput proteina. U ovoj metodi trebamo koristiti vodeni medij za izradu uzorka biomolekule. To je zato što organska otapala mogu uzrokovati denaturaciju proteina. Štoviše, ova tehnika koristi interakciju između velikih molekula s blago hidrofobnom površinom stacionarne faze. Nadalje, moramo koristiti visoku koncentraciju soli u uzorku jer potiče zadržavanje proteina na pakiranju; taj se postupak naziva soljenje. Postupnim smanjenjem koncentracije soli, možemo postići da se biomolekule odvojeno eluiraju prema njihovoj hidrofobnosti.
Ova metoda obično koristi uvjete suprotne onima kromatografije ionske izmjene. U ovoj tehnici, prvo, trebamo propustiti pufersku otopinu kroz kolonu kako bismo smanjili otapanje otopljene tvari u uzorku. Čini hidrofobne regije proteina izloženima. Međutim, kada je molekula hidrofobnija, potrebno je manje soli za poticanje vezanja. Ovdje se prvo eluiraju manje hidrofobne otopljene tvari, a prema promjeni koncentracije soli, posljednje se eluiraju hidrofobnije otopljene tvari.
Koja je razlika između RP HPLC i HIC?
Kromatografija je analitička tehnika za odvajanje komponenata u smjesi. RP HPLC i HIC dvije su specijalizirane kromatografske tehnike. Ključna razlika između RP HPLC i HIC je u tome što RP HPLC koristi polarniju mobilnu fazu i manje polarnu stacionarnu fazu, dok HIC koristi hidrofobnu stacionarnu fazu, koja omogućuje hidrofobnim molekulama da se vežu na nju.
Donja infografika sažima razliku između RP HPLC i HIC.
Sažetak – RP HPLC u odnosu na HIC
Kromatografija je analitička tehnika za odvajanje komponenata u smjesi. RP HPLC i HIC dvije su specijalizirane kromatografske tehnike. Ključna razlika između RP HPLC i HIC je u tome što RP HPLC koristi polarniju mobilnu fazu i manje polarnu stacionarnu fazu, dok HIC koristi hidrofobnu stacionarnu fazu, koja omogućuje hidrofobnim molekulama da se vežu na nju.
