Ključna razlika između HPLC-a s reverznom fazom i normalne faze je u tome što HPLC s reverznom fazom koristi nepolarnu stacionarnu fazu i polarnu mobilnu fazu, dok HPLC s normalnom fazom koristi polarnu stacionarnu fazu i manje polarnu mobilnu fazu.
HPLC normalne faze je najstarija tehnika HPLC koju je Tswett koristio u svojim odvajanjima biljnih ekstrakata; koristio je kredu u staklenom stupcu. To je bio klasični način kromatografije koji je doveo do naziva "normalnom" tehnikom. S druge strane, HPLC reverzne faze suprotna je uobičajenoj tehnici koju su znanstvenici nedavno razvili.
Što je HPLC reverzne faze?
HPLC reverzne faze je kromatografska tehnika u kojoj koristimo hidrofobnu stacionarnu fazu. Među svim HPLC metodama ovu metodu koristimo oko 70% zbog njene široke primjenjivosti i ponovljivosti. Stacionarna faza je nepolarna, a mobilna faza je polarna.
U većini slučajeva znanstvenici koriste vodenu mješavinu vode s mješljivim, polarnim organskim otapalom, poput acetonitrila ili metanola kao mobilne faze. Stoga analiti stupaju u interakciju s nepolarnom stacionarnom fazom.
Što je HPLC normalne faze?
HPLC normalne faze je kromatografska tehnika u kojoj koristimo hidrofilnu stacionarnu fazu. To je tradicionalna metoda HPLC, iako je ne koristimo toliko. Stacionarna faza je polarna, a mobilna faza je nepolarna. Što je još važnije, mobilna faza ove tehnike je 100% organska. To znači da se za to ne koristi voda.
Slika 01: Profil uzorka za kromatograme HPLC normalne faze i reverzne faze prema polaritetu komponenti u analitu.
Tipično, stacionarna faza sadrži silicijev dioksid, cijano, diol, faze s amino vezama itd. Mobilne faze uključuju organska otapala kao što su heksan, etil acetat itd. Ova se tehnika temelji na zadržavanju molekula otapala ili analita na polarna stacionarna faza.
Koja je razlika između HPLC reverzne faze i normalne faze?
HPLC reverzne faze je kromatografska tehnika u kojoj koristimo hidrofobnu stacionarnu fazu. Stacionarna faza ove tehnike je nepolarna dok je mobilna faza polarna. Štoviše, znanstvenici koriste vodenu mješavinu vode s polarnim organskim otapalom koje se može miješati, poput acetonitrila ili metanola, kao mobilnu fazu u HPLC-u reverzne faze. Nasuprot tome, normalna faza HPLC je kromatografska tehnika u kojoj koristimo hidrofilnu stacionarnu fazu. Stacionarna faza ove tehnike je polarna dok je mobilna faza nepolarna. Osim toga, znanstvenici koriste organska otapala kao što su heksan, etil acetat itd. kao mobilnu fazu normalne faze HPLC. Donja infografika prikazuje razliku između reverzne i normalne faze HPLC u obliku tablice.
Sažetak – HPLC reverzne faze u odnosu na normalnu fazu
Tehnike HPLC reverzne faze i normalne faze dvije su tehnike tekućinske kromatografije. Ključna razlika između HPLC reverzne faze i normalne faze je u tome što HPLC reverzne faze koristi nepolarnu stacionarnu fazu i polarnu mobilnu fazu, dok HPLC normalne faze koristi polarnu stacionarnu fazu i manje polarnu mobilnu fazu.
