Ključna razlika između HPLC-a i brzog HPLC-a je u tome što je tlak pumpe koji koristimo za HPLC oko 40 MPa, dok je tlak pumpe za brzi HPLC oko 3-5 MPa.
Najčešća tehnika koju koristimo za odvajanje komponenti smjese je “tekućinska kromatografija”. Postoji nekoliko tehnika za postizanje ove svrhe od kojih je HPLC vrlo popularan. HPLC je kratica za tekućinsku kromatografiju visoke učinkovitosti koja identificira, kvantificira i odvaja komponente tekuće smjese na brz i učinkovit način. Brza HPLC je posebna primjena HPLC-a koja je nedavno privukla pozornost onih koji su uključeni u proučavanje otopina.
Što je HPLC?
HPLC je tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti. Koristi visoki tlak za potiskivanje otapala tako da prođu kroz stupac. Također, to je idealan način za odvajanje i proučavanje različitih spojeva kao što su aminokiseline, nukleinske kiseline, ugljikohidrati, steroidi, antibiotici i ugljikovodici. HPLC ima mnoge prednosti u odnosu na druge metode odvajanja smjesa kao što su veća rezolucija i brža analiza. Briše potrebu za ponovnim pakiranjem i regeneracijom te nudi bolju kontrolu nad parametrima i time povećava učinkovitost odvajanja. U idealnom slučaju, HPLC je prikladan za velike primjene jer može odvojiti vrlo male čestice i dopušta upotrebu visokih tlakova koji otapalima olakšavaju protok.
Slika 01: HPLC kolona
Ukratko, metoda rada HPLC tehnike je sljedeća. Prvo, trebamo unijeti uzorak u tok mobilne faze u diskretnim malim količinama pomoću pumpe. Tlak pumpe treba održavati na 40 MPa. Ova struja mobilne faze perkolira kroz kolonu HPLC. Zatim, komponente u uzorku također prolaze kroz kolonu. Međutim, njihove brzine kretanja se međusobno razlikuju zbog razlike u interakcijama između komponenti uzorka i adsorbensa unutar kolone. Ovaj adsorbent nazivamo stacionarnom fazom jer se nalazi unutar kolone (ne kreće se). Zatim, na kraju kolone, možemo prikupiti uzorak koji eluira iz kolone, čime možemo odvojeno prikupiti komponente u uzorku.
Što je brzi HPLC?
Nedavno su znanstvenici istraživači na istraživačkom institutu Schering Plow razvili brzu HPLC tehniku koja je napredna verzija HPLC-a jer omogućuje još brže odvajanje spojeva iz smjese. Također, poznata kao brzi HPLC, ova tehnika koristi čestice silicijevog dioksida veličine 2,7 um fuzionirane jezgre koje se izrađuju spajanjem poroznog silicijevog dioksida veličine 0,5 um preko čvrste čestice silicijevog dioksida. Ove jedinstveno izrađene čestice čine postupak odvajanja vrlo brzim i to pri niskom povratnom tlaku od onoga što koristimo u HPLC-u.
Slika 02: FPLC aparat
Brzi HPLC daje rezultate usporedive s UPLC-om, ali znanstvenici smatraju da je ova tehnika superiornija jer ne zahtijeva vrlo skupu ultravisoku tlačnu opremu. Ono što je sjajno jest da brzi HPLC ne zahtijeva nikakve nove laboratorijske protokole.
Koja je razlika između HPLC-a i brzog HPLC-a?
HPLC je tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti, a brzi HPLC je napredni oblik tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti. Ključna razlika između HPLC-a i brzog HPLC-a je u tome što je tlak pumpe koji koristimo za HPLC oko 40 MPa. Dok je tlak pumpe za brzi HPLC oko 3-5 MPa. Nadalje, HPLC tehnikom možemo razdvojiti različite spojeve kao što su aminokiseline, nukleinske kiseline, ugljikohidrati, steroidi, antibiotici i ugljikovodici dok se brza HPLC tehnika uglavnom koristi za odvajanje proteina.
Infografika u nastavku predstavlja više informacija o razlici između HPLC-a i brzog HPLC-a.
Sažetak – HPLC u odnosu na brzi HPLC
HPLC je tehnika tekućinske kromatografije koja je postala vrlo popularna u cijelom svijetu. Fast HPLC je nova verzija HPLC-a, znanstvenici istraživači na Schering Plow Institutu razvili su ovu novu tehniku. Ključna razlika između HPLC-a i brzog HPLC-a leži u tlaku pumpe koji koristimo za odvajanje. To je; tlak pumpe koji koristimo za HPLC je oko 40 MPa. No, tlak pumpe za brzi HPLC je oko 3-5 MPa.
