Ključna razlika između HPLC i UPLC je u tome što HPLC omogućuje analizu čestica veličine oko 5 mikrometara, dok UPLC omogućuje mnogo manje čestice veličine oko 2 mikrometra.
HPLC i UPLC su obje tehnike tekućinske kromatografije koje su korisne u odvajanju komponenti spoja. Da bismo znali razliku između HPLC i UPLC, prvo moramo znati što je HPLC. To je zato što je UPLC posebna verzija HPLC-a i možemo je lako razumjeti ako znamo što je HPLC.
Što je HPLC?
Izraz HPLC označava tekuću kromatografiju visoke učinkovitosti. To je tehnika koju možemo koristiti za odvajanje različitih sastojaka spoja. Također, to je najčešće korištena tehnika za identifikaciju, kvantificiranje i odvajanje komponenti smjese. Osim toga, ova tehnika koristi visoki tlak za potiskivanje otapala kroz kolonu. Nadalje, glavne primjene HPLC-a su u biokemiji za analizu sastojaka spoja. To je idealan način za odvajanje i identifikaciju aminokiselina, nukleinskih kiselina, proteina, ugljikovodika, pesticida, ugljikohidrata, antibiotika, steroida i bezbrojnih drugih anorganskih tvari.
Slika 01: HPLC sustav u laboratoriju
Ukratko, metoda rada HPLC tehnike je sljedeća. Prvo, trebamo unijeti uzorak u tok mobilne faze u diskretnim malim količinama pomoću pumpe. Tlak pumpe treba održavati na 40 MPa. Zatim, ovaj tok mobilne faze perkolira kroz kolonu HPLC. Također, komponente u uzorku prolaze kroz kolonu. Međutim, njihove brzine kretanja se međusobno razlikuju. Ova razlika nastaje zbog razlike u interakcijama između komponenata uzorka i adsorbensa unutar kolone. Ovaj adsorbent nazivamo stacionarnom fazom jer se nalazi unutar kolone (ne kreće se). Drugo, na kraju kolone možemo prikupiti uzorak koji eluira iz kolone. Tamo možemo odrediti razlike u retencijskom vremenu za svaku komponentu u uzorku.
Što je UPLC?
Izraz UPLC je kratica za tekuću kromatografiju ultra visoke učinkovitosti. To je varijacija HPLC-a, ali je metoda rada ista. Međutim, za razliku od HPLC-a, ova metoda omogućuje analizu vrlo malih čestica, poput malih čestica od 2 mikrometra.
Slika 02: UPLC uređaj
Štoviše, pruža bržu analizu. U ovoj tehnici koristimo tlak pumpe od 100 MPa za umetanje uzorka u kolonu. Dakle, ovaj visoki tlak potvrđuje da je cijeli uzorak uveden u kolonu. Stoga je ovo vrlo učinkovito u usporedbi s HPLC-om.
Koja je razlika između HPLC i UPLC?
Pojam HPLC označava tekućinsku kromatografiju visoke učinkovitosti, dok pojam UPLC označava tekućinsku kromatografiju ultra visoke učinkovitosti. Stoga je UPLC tehnika razvijena verzija HPLC-a. Dakle, način rada je isti za obje tehnike. Međutim, UPLC je učinkovitiji u usporedbi s HPLC jer koristi visoki tlak pumpe; tlak pumpe za HPLC je 40 MPA dok je za UPLC 100 MPa. Stoga je ovo razlika između HPLC i UPLC. Iznad svega, ključna razlika između HPLC i UPLC je u tome što HPLC omogućuje analizu čestica veličine oko 5 mikrometara, dok UPLC omogućuje mnogo manje čestice veličine oko 2 mikrometra.
Sažetak – HPLC naspram UPLC
UPLC je oblik HPLC-a. Dakle, metode rada su iste. No, možemo pronaći neke poboljšane značajke u UPLC-u u usporedbi s HPLC-om. Stoga postoji određena razlika između HPLC i UPLC. Međutim, ključna razlika između HPLC i UPLC je u tome što HPLC omogućuje analizu čestica veličine oko 5 mikrometara, dok UPLC omogućuje mnogo manje čestice veličine oko 2 mikrometra.
