Ključna razlika – Gel elektroforeza u odnosu na SDS Stranica
Gel elektroforeza je tehnika koja razdvaja makromolekule u električnom polju. Uobičajena je metoda u molekularnoj biologiji za odvajanje DNA, RNA i proteina iz smjesa prema njihovoj molekularnoj veličini. SDS stranica je vrsta gel elektroforeze koja se koristi za odvajanje proteina iz proteinske smjese na temelju njihove veličine. Gel elektroforeza je izraz koji se koristi za označavanje normalne tehnike koja se primjenjuje za odvajanje DNA, RNA i proteina, dok je SDS Page jedna vrsta gel elektroforeze. Ovo je ključna razlika između gel elektroforeze i SDS stranice.
Što je gel elektroforeza?
Gel elektroforeza je uobičajena tehnika koja se koristi u laboratorijima za odvajanje nabijenih molekula kao što su DNA, RNA, proteini itd. iz njihovih smjesa. Gel se koristi u gel elektroforezi. Djeluje kao molekularno sito. Postoje dvije vrste gelova koji se koriste u gel elektroforezi, a to su agaroza i poliakrilamid. Odabir gela i pripreme gela važni su čimbenici koje treba uzeti u obzir u gel elektroforezi budući da treba pažljivo manipulirati veličinom pora gela za dobro odvajanje molekula putem gel elektroforeze. Gel elektroforeza ima električno polje povezano s dva kraja gela. Jedan kraj gela pokazuje pozitivan naboj dok je drugi kraj negativno nabijen.
DNA i RNA su negativno nabijene molekule. Nakon što se unesu u gel s negativnog kraja gela i nanesu na električno polje, migriraju kroz pore gela prema pozitivno nabijenom kraju gela. Brzina migracije ovisi o naboju i veličini molekule. Manje molekule lakše migriraju kroz pore gela od većih molekula. Dakle, manje molekule putuju dugo kroz gel, a veće molekule putuju kratko. Za promatranje putovanja molekula po gelu koriste se posebne vrste boja. Električno polje se primjenjuje na određeno vremensko razdoblje i zaustavlja kako bi se spriječio gubitak molekula i zadržale molekule na njihovim prijeđenim položajima. U gelu se mogu uočiti različite trake. Ove trake predstavljaju molekule različitih veličina. Stoga je elektroforeza u gelu korisna za razlikovanje molekula prema njihovoj veličini.
Gel elektroforeza je uključena u razne tehnike kao preparativna tehnika u molekularnoj biologiji kao što su PCR, RFLP, kloniranje, sekvencioniranje DNA, Southern blotting, mapiranje genoma, itd.
Slika 01: Elektroforeza u agaroznom gelu
Što je SDS stranica?
Natrijev dodecil sulfat poliakrilamidna gel elektroforeza (SDS stranica) vrsta je gel elektroforeze koja se koristi za odvajanje proteina. Kada se gel elektroforeza koristi za odvajanje proteina, potrebni su posebni tretmani jer proteini nisu negativno nabijeni kao DNK i RNK i ne migriraju prema pozitivnom ili negativnom kraju. Dakle, proteini su denaturirani i obloženi negativnim nabojem prije elektroforeze u gelu. Radi se pomoću deterdženta koji se zove natrijev dodecil sulfat (SDS). Gel elektroforeza koja koristi SDS i poliakrilamidni gel kao nosivi medij poznata je kao SDS Page. Ova tehnika se obično koristi u biokemiji, genetici, forenzici i molekularnoj biologiji.
Tijekom SDS Page, proteini se miješaju sa SDS. SDS razmotava proteine u linearni oblik i oblaže ih negativnim nabojem proporcionalnim njihovoj molekularnoj masi. Zbog negativnog naboja, molekule proteina migriraju prema kraju gela s pozitivnim nabojem i odvajaju se prema svojim molekulskim masama. U SDS stranici, poliakrilamid se koristi kao čvrsti nosač za gel. Stvarno odvajanje proteina uglavnom ovisi o svojstvima gela. Stoga, pripremu poliakrilamidnog gela treba pažljivo obaviti i treba koristiti točne koncentracije poliakrilamida. Poliakrilamidni gelovi pokazuju visoku rezoluciju od agaroznih gelova. Stoga se SDS stranica smatra tehnikom visoke razlučivosti za odvajanje proteina.
SDS Page je vrsta denaturirajuće gel elektroforeze. Ima veliko ograničenje u analizi proteina. Budući da SDS denaturira proteine prije odvajanja, ne dopušta otkrivanje enzimske aktivnosti, interakcija vezanja proteina, proteinskih kofaktora, itd.
Slika 02: SDS stranica
Koja je razlika između gel elektroforeze i SDS stranice?
Gel elektroforeza u odnosu na SDS Stranica |
|
| Gel elektroforeza je metoda koja se provodi za odvajanje makromolekula pomoću električnog polja. | SDS stranica je tehnika gel elektroforeze visoke rezolucije koja se koristi za odvajanje proteina na temelju njihove mase. |
| Gel Run | |
| Može se izvoditi vodoravno ili okomito. | SDS stranica uvijek radi okomito. |
| Osnova za razdvajanje | |
| Razdvajanje se odvija prema naboju i veličini. | Razdvajanje proteina se odvija prema masi i naboju. |
| Rezolucija | |
| Elektroforeza u agaroznom gelu ima nisku rezoluciju, a elektroforeza u poliakrilamidnom gelu ima višu rezoluciju | SDS stranica ima bolju rezoluciju. |
| Denaturacija | |
| Gel elektroforeza uključuje i denaturirajuće i nedenaturirajuće tehnike. | SDS stranica denaturira proteine prije odvajanja. |
Sažetak – Gel elektroforeza u odnosu na SDS Stranica
Gel elektroforeza je uobičajena tehnika koja se koristi za odvajanje i analizu DNA, RNA i proteina na temelju njihove veličine i naboja. Postoje dvije glavne vrste elektroforeze u gelu, a to su elektroforeza u agaroznom gelu i elektroforeza u poliakrilamidnom gelu. Agarozni gelovi koriste se uglavnom za odvajanje nukleinskih kiselina; kada je potrebna veća rezolucija koriste se poliakrilamidni gelovi. SDS stranica je vrsta gel elektroforeze koja se obično koristi za odvajanje složenih smjesa proteina. Smatra se tehnikom odvajanja proteina visoke rezolucije. Ovo je razlika između gel elektroforeze i SDS stranice.
