Ključna razlika – HPLC naspram LCMS
Pogledajmo prvo značenje HPLC i LCMS prije nego što analiziramo razliku između HPLC i LCMS. Kromatografija je tehnika odvajanja u kemijskoj analizi gdje se sastojci uzorka odvajaju tijekom prolaska kroz kromatografski medij. Također uključuje interakciju s uzorkom, stacionarnom fazom i mobilnom fazom. HPLC je kratica za High Performance Liquid Chromatography, a koristi se kao metoda tekućinske kromatografije u analitičkoj kemiji. Kombinacija tekućinske kromatografije i masene spektroskopije (LCMS) razvijena je za kvantitativnu analizu odabranih biomolekula i to je vrlo osjetljiv, točan i specifičan postupak ispitivanja u usporedbi s HPLC-om. Ovo je ključna razlika između HPLC i LCMC. Ovaj članak će vas upoznati s HPLC i LCMC koji se bave kemijskom analizom i raspravljati o razlikama između HPLC i LCMS.
Što je HPLC?
Tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti (HPLC) popularna je tehnika odvajanja u analitičkoj kemiji. Uglavnom se koristi za odvajanje komponenti, identifikaciju i kvantificiranje svake komponente u smjesi. Ranije je ova metoda bila poznata kao visokotlačna tekućinska kromatografija jer je ovisila o pumpama za protok tekućeg otapala pod tlakom koje je sadržavalo smjesu uzorka kroz kolonu napunjenu krutim adsorpcijskim materijalom. Svaki pojedini sastojak u mješavini uzorka različito djeluje s krutim adsorpcijskim materijalom, što rezultira različitim brzinama protoka za različite sastojke. To može dovesti do odvajanja sastojaka dok izlaze iz HPLC kolone.
HPLC se koristi za različite primjene kao što su analiza razine vitamina D u krvi, ilegalna upotreba droga kod sportaša otkrivanjem ostataka droge u njihovom urinu, razvrstavanje sastojaka složenog biološkog uzorka za potrebe istraživanja i analize i proizvodnju lijekova.
Što je LCMS?
Tekućinska kromatografija–masena spektrometrija (LCMS) je analitička tehnika koja kombinira fizičke sposobnosti razdvajanja tekućinske kromatografije sa sposobnostima analize mase masene spektrometrije (MS). Tekućinska kromatografija je tehnika odvajanja, a masena spektrometrija koristi se za analizu omjera mase i naboja nabijenih čestica. Fizičko odvajanje obično se postiže HPLC-om i alternativno, LCMS-om također poznatim kao HPLC-MS. LCMS je dominantna analitička tehnika koja ima vrlo visoku točnost, osjetljivost i specifičnost u usporedbi s HPLC-om. Stoga je koristan u mnogim primjenama kao što su istraživačke svrhe, analiza lijekova, analiza hrane itd. LCMS se uglavnom koristi za odvajanje, otkrivanje, identifikaciju i kvantificiranje biokemijskih svojstava određenog uzorka u prisutnosti složenih kemijskih smjesa.
Koja je razlika između HPLC i LCMC?
Akronim i definicija HPLC i LCMC
HPLC: HPLC je kratica za tekućinsku kromatografiju visoke učinkovitosti. To je tehnika odvajanja koja se uglavnom koristi za odvajanje komponenti, za identifikaciju i kvantificiranje svake komponente u smjesi.
LCMS: LCMS je kratica za tekućinsku kromatografiju i spektrometriju mase. To je analitička tehnika koja kombinira sposobnosti fizičke separacije tekućinske kromatografije sa sposobnostima analize mase masene spektrometrije (MS).
Karakteristike HPLC i LCMC
Klasifikacija
HPLC: Ovo je samo metoda tekućinske kromatografije.
LCMS: Ovo je kombinacija metode tekućinske kromatografije i metode masene spektrometrije.
Učinkovitost
HPLC: U usporedbi s LCMS, HPLC analiza je manje učinkovita i sporija.
LCMS: U usporedbi s HPLC-om, LCMS analiza je učinkovitija i brža.
Osjetljivost
HPLC: U usporedbi s LCMS, HPLC analiza je manje osjetljiva.
LCMS: U usporedbi s HPLC-om, LCMS analiza je osjetljivija.
Specifičnost
HPLC: U usporedbi s LCMS, HPLC analiza je manje specifična.
LCMS: U usporedbi s HPLC-om, LCMS analiza je specifičnija.
Točnost
HPLC: HPLC daje manje precizne rezultate od LCMS za određivanje nekih kemikalija.
LCMS: LCMS daje preciznije rezultate od HPLC za određivanje nekih kemikalija.
Komponenta
HPLC: HPLC se može smatrati komponentom LCMS.
LCMS: LCMS se ne može smatrati komponentom HPLC.
Izvor iona
HPLC: Izvor iona ne postoji u HPLC instrumentu.
LCMS: Izvor iona prisutan je u LCMS instrumentu.
Aplikacije
HPLC: Ioni, polimeri, organske molekule i biomolekule mogu se analizirati pomoću HPLC-a.
LCMS: mogu se analizirati organske molekule i biomolekule. Za razliku od HPLC-a, LCMS se može koristiti za ispitivanje nepotpuno razdvojenih smjesa.
Operacija
HPLC: Dijagram HPLC instrumenta dan je na slici 1, a obično uključuje automatski uzorkivač, pumpe i detektor. Uzorkivač uvodi smjesu uzorka u mobilnu fazu (mješavina otapala pod tlakom kao što su voda, acetonitril i/ili metanol) koja je prenosi u kolonu. Crpke isporučuju željeni protok i sastav mobilne faze kroz kolonu. Kolona je ispunjena adsorbensom, koji je zrnasta čvrsta čestica poput silicija ili polimera. Detektor proizvodi signal proporcionalan količini prisutnosti sastavnih dijelova uzorka u stupcu, čime se omogućuje mjerljiva analiza odabranih sastojaka uzorka. HPLC instrument je kontroliran, a analiza podataka omogućena je digitalnim mikroprocesorom i korisničkim softverom.
Slika 1: Dijagram HPLC instrumenta
LCMS: Dijagram LCMS instrumenta dan je na slici 2. Ekstrakt uzorka umetnut je u kolonu koja se sastoji od HPLC. Ovaj stupac zadržava uzorke metabolita na temelju fizičkih karakteristika, a različiti metaboliti teku u maseni spektrometar u različitim vremenskim intervalima. Masena spektroskopija koristi se za procjenu mase čestica, za određivanje elementarnog rasporeda molekule i za razjašnjavanje strukture molekule. Međutim, uzorak treba ionizirati kako bi se stvorile nabijene molekule kako bi se odredio njihov omjer mase i naboja. Stoga, umjesto HPLC instrumenata, LCMS se sastoji od dodatna tri modula kao što su izvor željeza, analizator mase i detektor. Izvor iona može transformirati uzorak plinovite faze u ione, a analizator mase grupira ione prema njihovim masama pomoću elektromagnetskih polja. Konačno, detektor kvantificira vrijednosti i isporučuje podatke o svakom ionu prisutnom u uzorku. LCMS tehnika može se koristiti i za kvalitativne i za kvantitativne primjene.
Slika 2: Dijagram LCMS instrumenta
U zaključku, HPLC je metoda tekućinske kromatografije dok je LCMS kombinacija tekućinske kromatografije i masene spektrometrije. Obje ove tehnike analize imaju različite karakteristike, ali se mogu koristiti za identifikaciju i kvantificiranje sastava hrane, lijekova i drugih bioaktivnih molekula.
