Ključna razlika između GFP i EGFP je u tome što je GFP protein divljeg tipa ugrađen u molekularno kloniranje stanica ne-sisavaca, dok je EGFP poboljšana ili projektirana vrsta GFP koja se može koristiti na stanicama sisavaca.
Molekularno kloniranje je napredna tehnika koju znanstvenici neizmjerno koriste u ekspresiji proteina putem rekombinantne tehnologije. U tehnologiji rekombinantne DNA, potrebno je uspješno transformirati rekombinantni vektor u organizam domaćina. Stoga, tijekom procesa transformacije, treba identificirati i potvrditi je li gen od interesa transformiran u domaćina ili ne. Kako bi to procijenili, molekularni biolozi usvajaju nekoliko tehnika. Od tih tehnika, jedna je reporter gen. Ovi reporterski geni djeluju kao selektivni markeri za odabir točnih transformanata. Dakle, zeleni fluorescentni protein (GFP) i poboljšani zeleni fluorescentni protein (EGFP) dva su reporterska proteina koja se koriste u molekularnom kloniranju.
Što je GFP?
GFP je divlji tip proteina koji sadrži 238 aminokiselinskih ostataka i nekoliko odabranih regija aminokiselinskih sekvenci koje ga razlikuju od ostalih fluorescentnih proteina. Nadalje, ovaj protein divljeg tipa izvorno je bio izoliran iz Aequorea Victoria; vrsta meduze. Međutim, u prirodnim fenomenima, meduza je bila u stanju proizvesti zelenu fluorescenciju kao odgovor na određene podražaje.
Ranije je ovaj koncept iznenadio znanstvenike i odlučili su ga upotrijebiti na svojim tehnologijama rekombinantne DNK. Posljedično, znanstvenici su koristili ovaj mutirani oblik gena divljeg tipa kao reporterski gen u svojim studijama ekspresije gena. Divlji tip gena GFP sposoban je proizvesti protein koji daje fluorescenciju na sobnoj temperaturi ili pod UV svjetlom. Stoga, kada se umetne u transformante, on izražava i proizvodi fluorescenciju. Ako fluorescencija nastane nakon procesa transformacije, to potvrđuje uspjeh procesa transformacije. Jednostavnim riječima, fluorescentna emisija signalizira uspješnu transformaciju vektora koji nosi gen od interesa u domaćina.
Slika 01: GFP
Zbog ovog razloga, GFP djeluje kao in vivo marker ekspresije gena. Trenutno se koriste tehnike genetskog inženjeringa za proizvodnju GFP-a. Također, dostupne su mnoge poboljšane verzije GFP-a kao što je EGFP. Dakle, ovo omogućuje učinkovitu upotrebu GFP-a u molekularnom kloniranju i studijama ekspresije gena.
Što je EGFP?
Poboljšani zeleni fluorescentni protein ili EGFP je poboljšana verzija GFP-a. Jednostavnim riječima, možemo definirati EGFP kao projektiranu verziju GFP-a divljeg tipa. Kada divlji tip gena GFP mutira, proizvodi korisne učinke. Dakle, mutirani gen GFP-a omogućuje ekspresiju novih znakova, a kao rezultat toga možemo proizvesti poboljšani GFP s poboljšanim karakteristikama. Nadalje, možemo uspješno uvesti mutacije u divlji tip GFP gena koristeći zračenje ili kemijske metode. Ovi mutirani geni potom proizvode EGFP, koji ima korisnija svojstva.
Slika 02: EGFP
Poboljšane karakteristike EGFP-a su sljedeće;
- Može emitirati jače fluorescentne signale.
- Ima visoku osjetljivost.
- Može se koristiti na stanicama sisavaca umjesto prokariota i drugih eukariota niže razine.
- Također, osigurava povećanu čistoću proizvoda.
Stoga, u usporedbi s GFP-om, EGFP je preferirani izbor za studije ekspresije gena. Međutim, proizvod je skuplji u usporedbi s GFP-om.
Koje su sličnosti između GFP-a i EGFP-a?
- GFP i EGFP dva su proteina koji imaju sposobnost emitiranja zelene boje
- Stoga, oba funkcioniraju kao reporterski proteini u studijama ekspresije gena.
- Također, moguće je sintetizirati oboje pomoću rekombinantne DNA tehnologije.
- Štoviše, lako je dodatno mutirati ove dvije vrste kako bi se sintetizirali poboljšani oblici.
Koja je razlika između GFP i EGFP?
Reporterski gen je gen koji se spaja s genom od interesa u tehnologiji rekombinantne DNK. On signalizira uspješnu transformaciju rekombinantnog vektora domaćinu. Ovdje su GFP i EGFP dvije vrste zelenih florescentnih proteina koji rade kao reporterski proteini. Međutim, ključna razlika između GFP-a i EGFP-a je u tome što je GFP divlji tip, dok je EGFP projektirana verzija GFP-a. Nadalje, EGFP ima korisnija svojstva od GFP-a. Na primjer, EGFP proizvodi jače fluorescentno svjetlo i osjetljiviji je od GFP-a. Još jedna razlika između GFP-a i EGFP-a su sustavi u kojima ih možemo koristiti. Sustavi koji nisu sisavci koriste GFP dok sustavi sisavaca koriste EGFP.
Infografika u nastavku prikazuje razliku između GFP-a i EGFP-a u obliku tablice.
Sažetak – GFP naspram EGFP
GFP i EGFP su reporterski proteini u studijama molekularnog kloniranja i ekspresije gena. GFP je protein divljeg tipa, koji je zeleni fluorescentni protein. Protein je u početku bio izoliran od meduze Aequorea victoria. Nasuprot tome, EFGP je poboljšani oblik GFP proteina. To je mutant divljeg tipa s poboljšanim karakteristikama. Stoga EFGP ima veću snagu signala i veću osjetljivost. Stoga ga možemo koristiti na vektorima sisavaca. Nasuprot tome, GFP se uglavnom koristi samo na vektorima koji nisu sisavci. Sve u svemu, ovo je razlika između GFP-a i EGFP-a.
