Ključna razlika između mikronukleusnog i kometnog testa je u tome što je mikronukleusni test važan za provjeru oštećenja kromosoma kao posljedice izloženosti mutagenima, dok je kometni test važan za otkrivanje primarnog oštećenja DNK u pojedinačnim stanicama.
Testovi genotoksičnosti pomažu u procjeni mogućnosti mutacija i kromosomskih abnormalnosti. Genotoksini uključuju kemijske tvari i zračenje. Karcinogeni, mutageni i teratogeni glavne su kategorije genotoksina. Uzrokuju različita oštećenja kao što su točkaste mutacije, delecije, jednolančani i dvostruki prekidi, kromosomske aberacije, formiranje mikronukleusa, popravak DNK i interakcije staničnog ciklusa. Takva stanja mogu dovesti do raznih bolesti, a testovi genotoksičnosti sprječavaju potencijalnu štetu od ovih stanja. Mikronukleusni test i kometni test dvije su tehnike u testovima genotoksičnosti.
Što je mikronukleusni test?
Micronucleus test je test za procjenu oštećenja kromosoma kao posljedice izloženosti mutagenima. Važan je u probiru kemikalija koje uzrokuju stvaranje vretena i mikronukleusa. Mikronukleusni test daje informacije o stabilnosti kemikalija kada ometaju strukturu i funkciju kromosoma. Mnogi karcinogeni su pozitivni u mikronukleus testovima. Proces analize uključuje kemijsku obradu i mjerenje učestalosti stanica s mikronuklearima. Ako postoji abnormalno povećanje broja mikronukleusnih stanica, zaključuje se da kemikalija uzrokuje kromosomsko oštećenje.
Analiza mikronukleusa obično se provodi na stanicama koje se aktivno dijele. Stoga su eritrociti i matične stanice koštane srži proizvedene diobom stanica idealni kandidati za takve testove. Doživljavaju stalnu i brzu promjenu. Budući da eritrociti nemaju prave jezgre, stanice s mikronuklearima postaju vidljivije na kraju testa.
Slika 01: Promatranje analize mikronukleusa
Micronucleus testovi su ekonomični, brži, praktični i zahtijevaju manje vještina za izvođenje. Oni brzo odražavaju kromosomske aberacije na pouzdan način i izuzetno su korisni za brzu procjenu kromosomskih oštećenja. Poseban i svestran tip mikronukleusnog testa je test mikronukleusnog citoma bloka citokineze (CBMNcyt). To je preferirani test za mjerenje kromosomskih oštećenja i nestabilnosti u stanicama. Međutim, glavni problem korištenja mikronukleus testa je taj što ne može odrediti različite vrste kromosomskih aberacija, a test ima utjecaj na brzinu mitoze i udio stanične smrti, uzrokujući promjenu rezultata.
Što je Comet Assay?
Komet test, koji je također poznat kao test elektroforeze s jednim gelom, jednostavna je i osjetljiva tehnika za otkrivanje oštećenja DNK. Mjeri lomove DNK u eukariotskim stanicama i standardna je tehnika za biomonitoring i ispitivanje genotoksičnosti.
Kometni test uključen je u inkapsulaciju stanica u suspenzije agaroze niske točke taljenja, lizu stanica u neutralnim ili alkalnim uvjetima i elektroforezu suspendiranih liziranih stanica. Tijekom procesa kapsuliranja, stanice se suspendiraju u rastaljenoj agarozi niske točke tališta, a agaroza tvori matricu ugljikohidratnih vlakana koja ih učvršćuju na mjestu. Agaroza je osmotski neutralna; stoga omogućuje da otopine prodru kroz gel i utječu na stanice bez da ih ometaju i pomiču. Otopina za lizu je visoko koncentrirana vodena otopina soli i deterdženta. Ova sol remeti proteine i obrasce vezivanja unutar stanice dok istovremeno remeti sadržaj RNA u stanici. Stanice se uništavaju, a svi proteini, RNK, citoplazmatski i nukleoplazmatski sastojci, razbijaju se i difundiraju u agarozni matriks, napuštajući DNK.
Slika 02: Ispitivanje kometa
Otopina za elektroforezu je alkalna otopina gdje dvostruka spirala DNK denaturira, a nukleoid postaje jednolančani. Tijekom ovog procesa primjenjuje se električno polje za analizu slika. Analiza slike mjeri ukupni intenzitet fluorescencije za DNK i nukleoid i uspoređuje to dvoje. Ukupna struktura nalikuje kometu s kružnom glavom koja odgovara preostaloj neoštećenoj DNK i repom za oštećenu DNK. Što je rep svjetliji i duži zbog jačih signala, to je veća razina oštećenja.
Koje su sličnosti između analize mikronukleusa i kometa?
- Mikronukleus i komet test su ekonomični, brži, praktični i zahtijevaju manje vještina.
- Uglavnom se izvode na DNK.
- Oba testa pomažu u procjeni mutacija i kromosomskih abnormalnosti.
- Štoviše, obje tehnike koriste kemikalije za provođenje postupka.
Koja je razlika između analize mikronukleusa i kometa?
Mikronukleusni test važan je u provjeri kromosomskih oštećenja kao posljedice izloženosti mutagenima, dok je komet test važan u otkrivanju primarnog oštećenja DNA u pojedinačnim stanicama. Dakle, ovo je ključna razlika između analize mikronukleusa i kometa. Također, mikronukleusni test dobro je poznat za otkrivanje klastogenosti i aneugenosti. Comet test se koristi kao test genotoksičnosti za otkrivanje primarnog oštećenja DNK u stanicama. Štoviše, mikronukleusni test daje informacije o stabilnosti kemikalija, dok je kometni test jednostanična gel elektroforeza.
Infografija u nastavku predstavlja razlike između testa mikronukleusa i kometa u obliku tablice za usporedbu.
Sažetak – Analiza mikronukleusa i kometa
Testovi genotoksičnosti pomažu u procjeni mogućnosti mutacija i kromosomskih abnormalnosti. Mikronukleusni test i kometni test dvije su tehnike u testovima genotoksičnosti. Mikronukleusni test procjenjuje kromosomska oštećenja kao posljedicu izloženosti mutagenima. Comet test je jednostavna i osjetljiva tehnika za otkrivanje oštećenja DNK. Dakle, ovo je ključna razlika između analize mikronukleusa i kometa. Mikronukleusna analiza važna je u traženju kemikalija koje uzrokuju stvaranje vretena i mikronukleusa. Comet test uključen je u kapsuliranje stanica u suspenzije agaroze niske točke taljenja, lizu stanica u neutralnim ili alkalnim uvjetima i elektroforezu suspendiranih liziranih stanica.
