Ključna razlika – izravna naspram neizravne ELISA
Enzimski imunotest (ELISA), poznat i kao enzimski imunotest, je serološki test koji otkriva antitijela u krvi. Koristi se kao dijagnostički alat za otkrivanje je li pacijent bio izložen određenoj vrsti virusa ili drugom infektivnom agensu (antigenu) i je li tijelo proizvelo protutijela protiv infekcije. ELISA također može identificirati prošle i sadašnje infekcije. Stoga liječnici često koriste ELISA kao test predprobira prije dubinske analize bolesti. Ovaj test se može izvesti u laboratoriju uzimanjem uzorka krvi pacijenta. Postoje dvije vrste ELISA testa: izravni ELISA i neizravni ELISA. Ključna razlika između izravne i neizravne ELISA je u tome što je neizravna ELISA osjetljivija i zahtijeva dodavanje sekundarnog antitijela, dok je izravna ELISA manje osjetljiva i koristi samo primarno antitijelo.
Što je Direct ELISA?
ELISA je dijagnostički test bolesti koji se provodi kako bi se utvrdila prisutnost određenih antigena ili antitijela u krvi. Radi se kao test na ploči. Koristi antitijela povezana s enzimima koji se lako testiraju. Prisutnost antigena u uzorku seruma veže se sa specifičnim antitijelima povezanim s enzimima. U završnom koraku dodaje se određeni supstrat koji reagira s enzimom. Enzim pretvara supstrat u obojeni proizvod ili proizvod koji proizvodi signal. Promjena boje kemijskog supstrata otkriva prisutnost određenog antitijela u uzorku seruma. Izravni ELISA test koristi samo primarno protutijelo povezano s enzimom. Nakon vezanja na antigen, brzo mijenja boju, što ukazuje na prisutnost uzročnika infekcije u krvi. Međutim, intenzitet signala je slabiji u izravnoj ELISA jer su epitopi ograničeni na vezanje antigena. Stoga je izravna ELISA manje osjetljiva u usporedbi s neizravnom ELISA.
Slika 01: Izravni ELISA test
Što je neizravna ELISA?
ELISA se može izvesti pomoću dvije vrste antitijela, naime; primarno antitijelo i sekundarno antitijelo. Indirektni ELISA alat koristi obje vrste antitijela za pojačavanje signala za bolje otkrivanje. Indirektna ELISA tehnika izvodi se na sljedeći način.
- Ploče se inkubiraju s antigenima i isperu kako bi se blokiralo nespecifično vezanje.
- Zatim se dodaju primarna antitijela i isperu.
- Sekundarna antitijela vezana na enzim se dodaju i isperu.
- Dodan je supstrat i ostavljeno da reagira s enzimima.
- Signali se otkrivaju i utvrđuje se prisutnost ili odsutnost specifičnog antigena u uzorku.
U neizravnom ELISA testu, nekoliko sekundarnih antitijela može se vezati na jedno primarno antitijelo. Sekundarna antitijela povezana su s enzimima koji se lako testiraju. Stoga jedno vezanje može dati jak signal zbog više od jedne interakcije. Stoga je neizravna ELISA osjetljivija od izravne ELISA. Međutim, neizravna ELISA može dati nespecifične signale zbog križnih reakcija sekundarnih protutijela.
Slika 02: Indirektni ELISA test
Koja je razlika između izravne i neizravne ELISA?
Izravna vs neizravna ELISA |
|
| Izravna ELISA je manje osjetljiva u usporedbi s neizravnom ELISA. | Indirektni ELISA je osjetljiviji. |
| Utrošeno vrijeme | |
| Izravni ELISA test je brz proces. | Indirektni ELISA oduzima puno vremena. |
| Upotreba antitijela | |
| Samo jedna vrsta antitijela (primarna antitijela) koristi se u izravnom ELISA testu. | Primarna i sekundarna antitijela koriste se za neizravni ELISA. |
| Veza s enzimima | |
| Primarna antitijela povezana su s enzimima. | Sekundarna antitijela povezana su s enzimima. |
| Unakrsna reaktivnost drugih protutijela | |
| Izravna ELISA eliminira unakrsnu reaktivnost drugih protutijela. | Na indirektnu ELISA-u utječe unakrsna reaktivnost drugih protutijela. |
| Signali | |
| Signali su slabi u usporedbi s neizravnom ELISA. | Signali se pojačavaju u neizravnoj ELISA. Stoga ga je lako otkriti. |
Sažetak – izravna protiv neizravne ELISA
ELISA je biokemijska tehnika koja se uglavnom koristi u imunologiji za otkrivanje prisutnosti antitijela ili antigena u uzorku krvi pacijenta. Može se provesti putem dva procesa poznata kao izravna ili neizravna ELISA. Izravni ELISA test koristi samo primarna antitijela za otkrivanje antigena, dok neizravni ELISA koristi primarna i sekundarna antitijela. U izravnoj ELISA-i, primarna su protutijela obilježena, dok su u neizravnoj ELISA-i obilježena sekundarna protutijela. Ovo je razlika između izravne i neizravne ELISA.
