Ključna razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije je u tome što izravna imunofluorescencija koristi jedno protutijelo koje djeluje protiv mete od interesa, dok neizravna imunofluorescencija koristi dva protutijela za označavanje mete od interesa.
Imunofluorescencija ili oslikavanje stanica je tehnika koja se koristi za označavanje specifičnog ciljanog antigena fluoroforom. Ovdje je fluorofor fluorescentni kemijski spoj koji može ponovno emitirati svjetlost nakon svjetlosne ekscitacije. Kada se fluorofor veže s ciljnim antigenom, omogućuje otkrivanje ciljne molekule u uzorku. Da bismo to dalje opisali, kada se antigen veže sa specifičnim antitijelom, može se konjugirati s fluoroforima. Stoga je lako detektirati prisutnost ciljanog antigena u uzorku promatranjem pod fluorescentnim mikroskopom.
Osim toga, postoje dvije vrste imunofluorescencije; izravna i neizravna imunofluorescencija. Razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije uglavnom leži u broju korištenih protutijela i konjugaciji fluorofora. To jest, u izravnoj imunofluorescenciji, fluorofor se izravno konjugira s primarnim protutijelom, dok se u neizravnoj imunofluorescenciji fluorofor konjugira sa sekundarnim protutijelom.
Što je izravna imunofluorescencija?
Imunofluorescencija koristi antitijela za otkrivanje specifičnih ciljnih antigena. Izravna imunofluorescencija je jedna od dvije vrste imunofluorescencije. U izravnoj imunofluorescenciji jedno protutijelo (primarno protutijelo) uključuje i fluorofor se izravno konjugira s primarnim protutijelom. Nakon vezanja protutijela s ciljanim antigenom, fluorofor emitira fluorescenciju koja se može detektirati fluorescentnim mikroskopom.
Slika 01: Izravna imunofluorescencija
Međutim, izravna imunofluorescencija je skupa metoda jer su primarno konjugirana antitijela skupa u usporedbi sa sekundarnim antitijelima. Ipak, ne uključuje dodatni korak, dakle, kraću tehniku. Nadalje, nespecifična vezanja su smanjena u izravnoj imunofluorescenciji. Stoga je unakrsna reaktivnost vrsta niska. Ali u detekciji, osjetljivost izravne imunofluorescencije je slaba u usporedbi s neizravnom imunofluorescencijom.
Što je neizravna imunofluorescencija?
Indirektna imunofluorescencija je druga vrsta imunofluorescencije koja uključuje dvije vrste antitijela kao što su primarna i sekundarna antitijela u označavanju ciljanog antigena. U ovoj metodi, fluorofor se konjugira sa sekundarnim antitijelom. Stoga ova tehnika uključuje dodatni korak.
Slika 02: Imunofluorescencija
Međutim, osjetljivost je visoka u ovoj metodi budući da se nekoliko fluorofora može konjugirati sa sekundarnim protutijelima i olakšava detekciju. Nadalje, neizravna imunofluorescencija je jeftinija zbog činjenice da je konjugacija sekundarnih antitijela jeftinija i lakša. U usporedbi s izravnom imunofluorescencijom, unakrsna reaktivnost vrsta visoka je u neizravnoj metodi.
Koje su sličnosti između izravne i neizravne imunofluorescencije?
- To su dvije vrste tehnika imunofluorescencije.
- Primarna antitijela i fluorofor uključuju obje metode.
- Također, reakcija antigen-antitijelo javlja se u obje metode.
- Nadalje, i izravna i neizravna imunofluorescencija koriste fluorescentni mikroskop za detekciju antigena.
Koja je razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije?
Imunofluorescencija može biti izravna ili neizravna na temelju konjugacije fluorofora s korištenim protutijelima. U izravnoj imunofluorescenciji, fluorofor se konjugira s primarnim protutijelom, koje je jedino protutijelo koje uključuje ovu tehniku. Nasuprot tome, kod neizravne imunofluorescencije, fluorofor se konjugira sa sekundarnim antitijelom, što je jedno od dva tipa antitijela koja su uključena u tehniku. Stoga je glavna razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije vrsta protutijela koja se konjugira s fluoroforom.
Sljedeća infografika pruža usporednu usporedbu razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije.
Sažetak – Izravna vs neizravna imunofluorescencija
Imunofluorescencija je tehnika koja se koristi za otkrivanje prisutnosti specifičnih antigena u uzorku. Ova tehnika koristi specifična antitijela. Stoga se u ovom slučaju antitijela konjugiraju s fluoroforima kako bi se otkrila pomoću fluorescentnog mikroskopa. Štoviše, postoje dvije vrste imunofluorescencije, naime izravna i neizravna imunofluorescencija. Izravna imunofluorescencija uključuje jedno protutijelo i fluorofor izravno konjugiran s tim protutijelom. Neizravna imunofluorescencija uključuje dva protutijela; primarni i sekundarni i fluorofor konjugiran sa sekundarnim antitijelom. Budući da se nekoliko sekundarnih protutijela može vezati s primarnim protutijelom i nekoliko fluorofora može konjugirati sa sekundarnim protutijelima, neizravna imunofluorescencija je osjetljivija metoda od izravne metode. Nadalje, neizravna metoda je jeftinija od izravne metode. Dakle, ovo je razlika između izravne i neizravne imunofluorescencije.
