Ključna razlika – imunofluorescencija u odnosu na imunohistokemiju
Dijagnostika bolesti, koja koristi metode molekularne biologije, postala je novo područje kliničke laboratorijske tehnologije. Uključuje sve testove i metode za prepoznavanje bolesti i razumijevanje uzroka bolesti analizom DNA, RNA ili eksprimiranih proteina u organizmu. Brz napredak u molekularnoj dijagnostici omogućio je temeljna istraživanja zaraznih i nezaraznih bolesti. Oni se koriste za određivanje promjena u sekvenci ili razinama ekspresije u ključnim genima ili proteinima uključenim u bolest. Imunofluorescencija (IF) i imunohistokemija (IHC) dvije su tako široko korištene tehnike u biologiji raka. IF je vrsta IHC-a gdje se metoda fluorescentne detekcije koristi za analizu monoklonskih i poliklonskih protutijela, dok IHC koristi kemijske metode za otkrivanje monoklonskih i poliklonskih protutijela. Ovo je ključna razlika između IF i IHC.
Što je imunofluorescencija (IF)?
Imunofluorescencija je tehnika detekcije gdje se protutijela koja se koriste u analizi obilježavaju pomoću fluorescentnih boja ili fluorescentnih proteina u svrhu detekcije. Označena sekundarna protutijela mogu rezultirati neželjenim pozadinskim signalima; stoga se IF tehnika temelji na trenutnom označavanju samog primarnog antitijela kako bi se izbjegli neželjeni signali tijekom detekcije. Ovom tehnikom sprječava se nespecifično vezanje između primarnog i sekundarnog protutijela, a ono je brže jer nema sekundarnog koraka inkubacije. Kvaliteta podataka je također poboljšana.
Slika 01: Dvostruko imunofluorescentno bojenje za BrdU, NeuN i GFAP
Fluorokromi ili fluorescentne boje su spojevi koji mogu apsorbirati zračenje, po mogućnosti ultraljubičasto zračenje koje se pobuđuje. Kada čestice iz pobuđenog stanja dosegnu osnovno stanje, emitiraju zračenje koje detektor hvata i detektira da bi se formirao spektar. Od velike je važnosti da je fluorescentna oznaka kompatibilna i stabilna za određenu reakciju i treba biti pravilno konjugirana s antitijelom kako bi se dobili točni rezultati. Jedan od najčešće korištenih fluorokroma je fluorescein izotiocijanat (FITC), koji je zelene boje, s vršnim valnim duljinama apsorpcije i emisije od 490 nm, odnosno 520 nm. Rodamin, drugi agens koji se koristi u IF, crvene je boje i ima jasne valne duljine apsorpcije i emisije od 553 nm i 627 nm.
Što je imunohistokemija (IHC)?
IHC je metoda molekularnog testiranja koja se provodi kako bi se identificirala i potvrdila prisutnost antigena u ciljnoj stanici. Ciljna stanica može biti infektivna čestica, mikrobni patogen ili stanica malignog tumora. IHC koristi monoklonska i poliklonska protutijela za određivanje prisutnosti antigena prisutnih na staničnoj površini ciljnih stanica. Tehnika se temelji na vezivanju antigen-antitijelo. Detekcijski marker je konjugiran s tim antitijelima kako bi se otkrila prisutnost ili odsutnost određenog antigena. Ti markeri mogu biti kemijski markeri kao što su enzimi, fluorescentno označena antitijela ili radioaktivno označena antitijela.
Slika 02: Isječak mišjeg mozga obojen imunohistokemijom
Najpopularnija primjena IHC-a je u biologiji stanica raka za prepoznavanje prisutnosti malignih tumora, ali se također koristi za otkrivanje zaraznih bolesti.
Koje su sličnosti između imunofluorescencije i imunohistokemije?
- Imunofluorescencija i imunohistokemija odvijaju se u in vitro uvjetima.
- Obje tehnike temelje se na antigen-antitijelo
- Obje su vrlo brze tehnike.
- Rezultati tehnika su ponovljivi.
- Obje imaju poboljšanu kvalitetu podataka.
- Ove tehnike koje se koriste u dijagnostici raka i zaraznih bolesti.
Koja je razlika između imunofluorescencije i imunohistokemije?
Imunofluorescencija vs imunohistokemija |
|
| IF je tehnika detekcije gdje se antitijela koja se koriste u analizi obilježavaju pomoću fluorescentnih boja ili fluorescentnih proteina za detekciju. | IHC je tehnika detekcije gdje se protutijela koja se koriste u analizi obilježavaju pomoću kemikalija ili radioaktivnih elemenata za detekciju. |
| Točnost | |
| Točnost je veća u IF tehnici u usporedbi s IHC. | Točnost je niža u IHC. |
| Specifičnost | |
| IF je precizniji. | IHC je manje specifičan. |
Sažetak – Imunofluorescencija vs imunohistokemija
Molekularni mehanizmi doveli su do mnogih promjena u području medicine, dovevši do naprednih molekularnih metoda ispitivanja koje su dovele do revolucije u području dijagnostike. Ovi izumi doveli su do brze i točne identifikacije i potvrde bolesti, čime je omogućena uspješna primjena i proizvodnja lijekova. Ove se tehnike također koriste u farmakologiji kako bi se pronašle mete lijekova i potvrdile farmakokinetička svojstva lijeka tijekom metabolizma lijeka. IF i IHC su dvije dijagnostičke metode koje se temelje na konceptu vezanja antigena i antitijela, iako se način detekcije kod obje tehnike razlikuje. IF koristi princip fluorescencije za otkrivanje antigena, a IHC koristi koncept kemijske konjugacije za otkrivanje antigena. Ovo je razlika između IF i IHC.
Preuzmite PDF verziju Imunofluorescencije vs Immunohistochemistry
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za izvanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. Ovdje preuzmite PDF verziju. Razlika između imunofluorescencije i imunohistokemije.
