Ključna razlika – In situ hibridizacija u odnosu na imunohistokemiju
Dijagnostika raka i zaraznih bolesti popularan je trend u kojem se nove tehnike temeljene na proteomici i genomici koriste u svrhu identifikacije tumora ili zaraznih stanica, njihove proliferacije i mjesta razvoja stanica te analize genetske osnove većine zaraznih i nezarazne bolesti. To će rezultirati preciznom obradom i dizajnom lijekova te razvojem prilagođenih terapija za bolesti. Hibridizacija in situ (ISH) i imunohistokemija (IHC) dvije su tako široko korištene tehnike u biologiji raka, a ključna razlika između hibridizacije in situ i imunokemije leži u molekulama koje se koriste u postupku analize. U ISH, probe nukleinske kiseline se koriste u analizi, dok se u IHC, monoklonska i poliklonska antitijela koriste za dijagnostička određivanja.
Što je in situ hibridizacija (ISH)?
In situ hibridizacija je tehnika hibridizacije nukleinske kiseline koja se izvodi izravno na dijelu ili presjeku tkiva, u cijelom tkivu ili u stanicama. Tehnika ovisi o teoriji Watson Crick komplementarnog sparivanja baza, što rezultira ili DNA-DNA hibridima ili DNA-RNA hibridima koji mogu detektirati mutirane gene ili identificirati traženi gen od interesa. Jednolančane DNA sekvence, dvolančane DNA sekvence, jednolančane RNA sekvence ili sintetske oligonukleotidne sekvence koriste se kao sonde tijekom tehnike hibridizacije, a te se sonde obilježavaju radioaktivnim fosforom na svom 5' kraju za identifikacijske postupke nakon autoradiografije ili se obilježavaju pomoću fluorescentnih boja. Dostupne su različite vrste ISH tehnika ovisno o vrsti sonde koja se koristi i vrsti tehnike vizualizacije koja se slijedi.
Slika 01: Fluorescentna in situ hibridizacija
Postoje mnoge primjene ISH-a, uglavnom u molekularnoj dijagnostici zaraznih bolesti kako bi se identificirala prisutnost patogena i potvrdio patogen putem molekularne dijagnostike. Također se koristi u područjima razvojne biologije, kariotipizacije i filogenetske analize i fizičkog mapiranja kromosoma.
Što je imunohistokemija (IHC)?
U tehnici IHC, glavna analizirana molekula je antigen. Tijekom IHC-a koriste se monoklonska i poliklonska protutijela za određivanje prisutnosti antigena nakon infekcije ili statusa proliferacije malignih stanica. Tehnika se temelji na vezivanju antigen-antitijelo, a za ovu tehniku koriste se enzimske oznake; jedna takva primjena je ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Markeri također mogu biti fluorescentno označena antitijela ili radioaktivno označena antitijela.
Slika 02: Imunohistokemija
IHC se široko koristi za detekciju stanica raka. Dijagnostički postupci usmjereni su na antigene prisutne na tumorskim stanicama kako bi se identificirao i karakterizirao tumor. Isti postupak je uključen za dijagnosticiranje uzročnika infekcije. Monoklonska i poliklonska antitijela također se koriste za analizu različitih genskih produkata omogućavanjem reakcije vezanja antitijela i antigena između željenog proteina i primijenjenog sintetskog antitijela.
Koje su sličnosti između in situ hibridizacije i imunohistokemije?
- ISH i IHC su vrlo specifične reakcije.
- Obje tehnike su vrlo precizne.
- Obje tehnike mogu se koristiti u dijagnostici raka i zaraznih bolesti.
- Ove tehnike izvode se u sterilnim in vitro okruženjima.
- Obje su brze tehnike koje daju ponovljive rezultate.
- ISH i IHC koriste metode detekcije kao što su radiooznačavanje i tehnike fluorescencije.
Koja je razlika između in situ hibridizacije i imunohistokemije?
In situ hibridizacija u odnosu na imunohistokemiju |
|
| ISH je tehnika hibridizacije nukleinskih kiselina koja se izravno izvodi na dijelu ili presjeku tkiva ili cijelom tkivu. | IHC je tehnika u kojoj se monoklonska i poliklonska protutijela koriste za određivanje prisutnosti antigena, koji su posebni proteinski markeri smješteni na površini stanica. |
| Vrsta analiziranih bioloških molekula | |
| ISH analizira nukleinske kiseline. | IHC analizira proteine-antigene. |
| Osnova biokemijske reakcije | |
| U ovoj tehnici dolazi do komplementarnog sparivanja baza između DNA-DNA ili DNA-RNA. | Interakcije antigen-antitijelo uključene su u imunohistokemiju. |
| Metode detekcije povezane s enzimima | |
| Metode detekcije povezane s enzimima ne mogu se koristiti u ISH. | Metode detekcije povezane s enzimima mogu se koristiti u IHC. |
Sažetak – In situ hibridizacija u odnosu na imunohistokemiju
Molekularna dijagnostika su brze i potvrdne metode koje se mogu koristiti za identifikaciju nezaraznih bolesti kao što je rak ili zaraznih bolesti kao što je HIV ili tuberkuloza na temelju molekularnih markera prisutnih na stanicama koji dovode do manifestacije bolesti. Molekularni markeri mogu biti prisutni u obliku eksprimiranih proteina ili na genetskoj razini na temelju koje se uvode različite nove tehnike za povećanje učinkovitosti i manje su naporne, iako su te tehnike skupe. Tako ISH ovisi o formiranju DNA-DNA ili DNA-RNA hibrida, a IHC ovisi o specifičnim reakcijama između protutijela i antigena. Ovo je razlika između in situ hibridizacije.
Preuzmite PDF verziju hibridizacije in situ protiv imunohistokemije
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za izvanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. Ovdje preuzmite PDF verziju. Razlika između in situ hibridizacije i imunohistokemije.
