Ključna razlika između ploče za izlijevanje i ploče za nanošenje je u tome što se poznati volumen uzorka rasporedi po površini agar medija u ploči za nanošenje, dok se u ploči za izlijevanje poznati volumen uzorka miješa s agar i zatim izlio u tanjur. Kada se uspoređuje točnost ove dvije tehnike, ploča za izlijevanje ima veću točnost od ploče za širenje.
Standardna metoda brojanja na ploči je pristup koji se temelji na rastu i broji broj živih (rastućih/kultiviranih/živih) mikroorganizama unutar uzorka. To je moćna metoda koja se koristi u mnogim mikrobiološkim područjima za analizu broja živih mikroorganizama. Polja kao što su hrana i mliječni proizvodi, medicina, okoliš, vodena i poljoprivredna, mikrobna genetika, molekularna mikrobiologija, razvoj medija za rast i biotehnologija (bioreaktorska tehnologija, fermentacija, obrada otpada/otpadnih voda itd.) koriste ovu tehniku. Nadalje, postoje dva glavna načina za izvođenje standardnog brojanja ploča: to su tehnika širenja ploče i tehnika izlijevanja ploče.
Što je Pour Plate?
Tehnika izljevne ploče je mikrobna metoda za prebrojavanje nekih živih stanica prisutnih u uzorku. Posebnost metode pour plate je da se poznati volumen uzorka prvo pomiješa s agarom, a zatim izlije u ploču.
Slika 01: Tanjur za izlijevanje
Ostali koraci slični su tehnici raširene ploče o kojoj se govori u sljedećem odjeljku. Sljedeći korak nakon izlijevanja agara pomiješanog s uzorkom je dopustiti da se skrutne i inkubirati. Nakon inkubacije, brojanje kolonija sposobnih za život bitno je za izračunavanje konačne CFU za 1 g ili 1 ml.
Što je Spread Plate?
Spread plate je tehnika za brojanje živih stanica u uzorku. Za ovu tehniku potrebno je serijsko razrjeđivanje uzorka kako bi se osiguralo da barem jedan uzrokuje izbrojiv broj kolonija. Ovdje se radi o pipetiranju određenog volumena razrijeđene otopine na površinu ploče agara i brzom i ravnomjernom nanošenju na površinu agara staklenim raspršivačem koji je spaljen u alkoholu i ohlađen. Izvođenje ponavljanja potrebno je za dobivanje pouzdane srednje vrijednosti. Sljedeći korak je kratko sušenje ovih ploča, zatim preokrenuti i staviti ih u inkubator na prikladnu temperaturu za rast i na određeno razdoblje inkubacije.
Slika 02: Raširena ploča
Nakon inkubacije, pregled pločica će pokazati rast. Pri jednom ili više razrjeđenja, broj stanica prisutnih u inokulantima (npr. 100 ili 200 μl) će dovesti do između 30 i 300 diskretnih kolonija na površini agara. Manje od 30 brojanja kolonija je statistički nepouzdano. Brojeve iznad 300 teško je nabrojati i podložni su greškama.
Koje su sličnosti između ploče za izlijevanje i ploče za širenje?
- Raširite ploču i izlijte ploču dvije su tehnike za dobivanje broja živih stanica prisutnih u uzorku.
- Obje su izravne metode.
- Pogreške uzorkovanja mogu se dogoditi u obje metode.
- Ograničenja uvjeta rasta utječu na ishod obje metode.
- Tehničke pogreške također mogu utjecati na konačni rezultat obje metode.
- Iako su održive, dvije metode se ne koriste za uzgoj bakterija koje se ne mogu uzgajati.
Koja je razlika između ploče za izlijevanje i ploče za širenje?
Pločica za izlijevanje mikrobna je tehnika za određivanje broja živih stanica u uzorku. Tehnika raširene ploče još je jedna tehnika za nabrajanje bakterija koje rastu na površini medija. U tehnici ploče za izlijevanje, postupak je dodavanje uzorka na površinu očvrslog medija na ploči za izlijevanje. Ali, u tehnici spred ploče, postupak je miješanje uzorka s rastaljenim agarom i zatim to izlijevanje u ploču.
Što se tiče točnosti ove dvije tehnike, ploča za izlijevanje ima veću točnost od ploče za širenje. Štoviše, za razliku od ploče za izlijevanje, stakleni razmazivač koristi se za ravnomjerno raspoređivanje uzorka po površini na ploči za razlivanje. Nadalje, pomoću ploče za izlijevanje moguće je nabrojati aerobe, anaerobe i fakultativne anaerobe. Međutim, korištenjem ploče za širenje moguće je samo nabrojati aerobe. Nadalje, ploče sa skrutnutim agarom potrebne su za izvođenje ploče za širenje, dok su tekući rastaljeni agar mediji potrebni za metodu izlijevanja.
Sažetak – Tanjur za izlijevanje u odnosu na tanjur za širenje
Pour plate i Spread plate dvije su tehnike u mikrobiologiji za olakšavanje brojanja mikrobnih stanica u uzorku. Obje metode temelje se na rastu, stoga mjerite stanice sposobne za život. Tijekom ploče za izlijevanje, poznati volumen uzorka se pomiješa s rastaljenim agarom i ulije u ploču. Tijekom ploče za širenje, poznati volumen se rasporedi po površini skrutnutog agar medija. Ovo je razlika između ploče za izlijevanje i ploče za širenje.
