Ključna razlika – protočna citometrija u odnosu na FACS
U kontekstu stanične teorije, stanice su osnovna strukturna i funkcionalna jedinica svih živih organizama. Razvrstavanje stanica je metodologija koja se koristi za odvajanje različitih stanica prema fiziološkim i morfološkim značajkama. Mogu biti intracelularnih i izvanstaničnih karakteristika. Interakcija DNA, RNA i proteina smatra se unutarstaničnim interaktivnim svojstvima, dok se oblik, veličina i različite površine proteina smatraju izvanstaničnim svojstvima. U suvremenoj znanosti, metodologije razvrstavanja stanica dovele su do pomoći u različitim istraživanjima u biološkim studijama i također u uspostavljanju novih principa kroz istraživanja u medicini. Razvrstavanje ćelija provodi se različitim metodologijama koje uključuju primitivne s manje opreme i napredne tehnološke metodologije uz korištenje sofisticiranih strojeva. Protočna citometrija, fluorescentno aktivirano sortiranje stanica (FACS), magnetska selekcija stanica i sortiranje pojedinačnih stanica glavne su metodologije koje se koriste. Protočna citometrija i FACS razvijeni su za razlikovanje stanica prema njihovim optičkim svojstvima. FACS je specijalizirana vrsta protočne citometrije. Protočna citometrija je metodologija koja se koristi tijekom analize heterogene populacije stanica prema različitim molekulama stanične površine, veličini i volumenu što omogućuje istraživanje pojedinačnih stanica. FACS je postupak kojim se uzorak mješavine stanica razvrstava prema njihovim karakteristikama raspršenja svjetlosti i fluorescencije u dva ili više spremnika. Ovo je ključna razlika između protočne citometrije i FACS-a.
Što je protočna citometrija?
Protočna citometrija je metoda koja se koristi za ispitivanje i određivanje ekspresije unutarstaničnih molekula i stanične površine te za definiranje i karakterizaciju različitih tipova stanica. Također se koristi za određivanje volumena i veličine stanica te za procjenu čistoće subpopulacija koje su izolirane. To omogućuje procjenu više parametara pojedinačnih ćelija u približno isto vrijeme. Protočna citometrija koristi se za mjerenje intenziteta fluorescencije koja nastaje zbog fluorescentno obilježenih protutijela koja pomažu u identificiranju proteina ili liganda koji se vežu na povezane stanice.
Slika 01: Protočna citometrija
Općenito, protočna citometrija uključuje uglavnom tri podsustava. To su fluidika, elektronika i optika. U protočnoj citometriji dostupno je pet glavnih komponenti koje se koriste u razvrstavanju stanica. To su protočna ćelija (struja tekućine koja se koristi za njihov transport i poravnavanje ćelija za proces optičkog očitavanja), sustav mjerenja (može biti različitih sustava uključujući živine i ksenonske žarulje, vodeno hlađene velike snage ili zrakom hlađeni laseri male snage ili diodni laseri), ADC; Sustav analogno-digitalnog pretvarača, sustav pojačanja i računalo za analizu. Akvizicija je proces kojim se prikupljaju podaci iz uzoraka pomoću protočnog citometra. U tom procesu posreduje računalo koje je povezano s protočnim citometrom. Softver koji se nalazi u računalu analizira informacije dostavljene računalu iz protočnog citometra. Softver također ima mogućnost podešavanja parametara eksperimenta kontrolirajući protočni citometar.
Što je FACS?
U kontekstu protočne citometrije, razvrstavanje stanica aktivirano fluorescencijom (FACS) je metoda koja se koristi za diferencijaciju i razvrstavanje uzorka mješavine bioloških stanica. Stanice su odvojene od dva ili više spremnika. Metoda razvrstavanja temelji se na fizičkim značajkama stanice koje uključuju karakteristike raspršenja svjetlosti i fluorescencije stanice. Ovo je važna znanstvena tehnika koja se može koristiti za dobivanje pouzdanih kvantitativnih i kvalitativnih rezultata fluorescentnih signala koji se emitiraju iz svake stanice. Tijekom FACS-a, u početku, prethodno dobivena mješavina stanica; suspenzija je usmjerena u središte uskog toka tekućine koji brzo teče. Protok tekućine je dizajniran tako da odvoji stanice u suspenziji na temelju promjera svake ćelije. Mehanizam vibracija primjenjuje se na mlaz suspenzije što rezultira stvaranjem pojedinačnih kapljica.
Slika 02: FACS
Sustav je kalibriran kako bi stvorio jednu kapljicu s jednom ćelijom. Neposredno prije formiranja kapljica, tekućina suspenzije kreće se duž aparata za mjerenje fluorescencije koji otkriva karakteristike fluorescencije svake stanice. Na točki formiranja kapljica postavlja se prsten za električno naelektrisanje čiji se naboj inducira na prstenu prije mjerenja intenziteta fluorescencije. Nakon što se kapljice formiraju iz toka suspenzije, naboj je zarobljen unutar kapljica koji zatim ulazi u elektrostatički otklonski sustav. Sukladno naboju, sustav preusmjerava kapljice u različite spremnike. Metoda primjene naboja razlikuje se ovisno o različitim sustavima koji se koriste u FACS-u. Oprema koja se koristi u FACS-u poznata je kao fluorescentno aktivirani razvrstivač stanica.
Koja je sličnost između protočne citometrije i FACS-a?
Protočna citometrija i FACS razvijeni su za razlikovanje stanica prema njihovim optičkim svojstvima
Koja je razlika između protočne citometrije i FACS-a?
Protočna citometrija u odnosu na FACS |
|
| Protočna citometrija je metodologija koja se koristi tijekom analize heterogene populacije stanica prema različitim molekulama stanične površine, veličini i volumenu što omogućuje istraživanje pojedinačnih stanica. | FACS je proces kojim se uzorak mješavine stanica razvrstava prema njihovim karakteristikama raspršenja svjetlosti i fluorescencije u dva ili više spremnika. |
Sažetak – Protočna citometrija u odnosu na FACS
Stanica je osnovna strukturna i funkcionalna jedinica svih živih organizama. Razvrstavanje stanica je proces kojim se stanice izoliraju i diferenciraju u različite kategorije na temelju njihovih intracelularnih i izvanstaničnih svojstava. Protočna citometrija i FACS dvije su važne metodologije u sortiranju stanica. Oba su procesa razvijena za razlikovanje stanica prema njihovim optičkim svojstvima. Protočna citometrija je metodologija koja se koristi tijekom analize heterogene populacije stanica prema različitim molekulama stanične površine, veličini i volumenu što omogućuje istraživanje pojedinačnih stanica. FACS je postupak kojim se uzorak mješavine stanica razvrstava prema njihovim karakteristikama raspršenja svjetlosti i fluorescencije u dva ili više spremnika. Ovo je razlika između protočne citometrije i FACS-a.
Preuzmite PDF verziju protočne citometrije u odnosu na FACS
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za izvanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. PDF verziju preuzmite ovdje. Razlika između protočne citometrije i FACS
