Ključna razlika – bojenje po Gramu u odnosu na kiselinu
Bakterije su vrlo mali mikroorganizmi. Prozirne su i teško ih je detektirati u živim i neobojanim uvjetima. Stoga su razvijene različite metode bojenja kako bi se olakšalo otkrivanje bakterija. Postoje tri glavne vrste tehnika bojenja: jednostavno bojenje, diferencijalno bojenje i strukturno bojenje. Diferencijalno bojenje je tehnika koja koristi više od jedne boje za razlikovanje bakterija. Bojenje po Gramu i bojenje otporno na kiselinu najpopularnije su poznate kao diferencijalne boje. Bojanje po Gramu je tehnika diferencijalnog bojenja, koja razdvaja bakterije u dvije skupine poznate kao Gram-pozitivne bakterije i Gram-negativne bakterije. Boja otporna na kiselinu je diferencijalna boja koja se koristi za identifikaciju organizama otpornih na kiseline kao što je Mycobacterium od organizama koji nisu otporni na kiseline. Ovo je ključna razlika između bojenja po Gramu i bojenja otpornog na kiseline.
Što je bojenje po Gramu?
Bojanje po Gramu je važna tehnika diferencijalnog bojenja koja se koristi za identifikaciju bakterija u mikrobiologiji. Ovu tehniku uveo je danski bakteriolog Hans Christian Gram 1884. godine. Bojanje po Gramu kategorizira bakterije u dvije glavne skupine nazvane gram pozitivne i gram negativne, koje su vrlo važne u klasifikaciji i identifikaciji bakterija. Mikrobiolozi provode bojenje po Gramu kao početni korak u karakterizaciji bakterija tijekom svojih studija.
Bakterije su grupirane na temelju razlika u njihovoj staničnoj stijenci. Gram pozitivne bakterije sastoje se od debelog sloja peptidoglikana u svojoj staničnoj stijenci, dok se gram negativne bakterije sastoje od tankog sloja peptidoglikana u svojoj staničnoj stijenci. Ishod bojenja po Gramu temeljit će se na razlici u debljini sloja peptidoglikana stanične stijenke.
Bojanje po Gramu izvodi se pomoću četiri različita reagensa, naime; primarni bajc, jedkasto sredstvo, sredstvo za dekolorizaciju i kontra bajc. Kristalna ljubičasta i safranin koriste se kao primarna i protubojna sredstva, dok se gram jod i 95% alkohol koriste kao jetkanje i obezbojivač. Osnovni koraci bojenja po gramima su sljedeći;
- Bakterijski bris se priprema na čistom stakalcu, fiksira se toplinom i hladi.
- Razmaz se prelijeva kristalno ljubičastom bojom 1 – 2 minute.
- Razmaz se ispire sporo tekućom vodom iz slavine kako bi se uklonio višak mrlja.
- Gram joda nanosi se na bris 1 minutu.
- Razmaz se ispire sporo tekućom vodom iz slavine
- Razmaz se ispire 95% alkoholom 2 – 5 sekundi i ispire laganom tekućom vodom iz slavine.
- Razmaz se boji safraninom 1 minutu
- Razmaz se ispire sporo tekućom vodom iz slavine, suši i promatra pod mikroskopom.
Na kraju bojenja po Gramu, gram negativne bakterije će se vidjeti u ružičastoj boji dok će se gram pozitivne bakterije vidjeti u ljubičastoj boji.
Slika 01: Gram negativne i Gram pozitivne bakterije
O ishodu bojenja po gramima odlučuje debljina sloja peptidoglikana u njihovoj staničnoj stijenci. Tijekom koraka obezbojavanja, primarna mrlja i jedkasto sredstvo lako se uklanjaju s gram negativnih bakterija i postaju bezbojni budući da imaju tanki sloj peptidoglikana. Primarna boja se zadržava u gram pozitivnim bakterijama jer imaju debeli sloj peptidoglikana. Suprotno bojanje neće biti učinkovito za gram pozitivne bakterije zbog zadržavanja primarne boje. Tako će gram pozitivne bakterije biti vidljive u primarnoj boji mrlja, odnosno ljubičastoj boji. Protuboja će obojiti gram negativne bakterije, a one će biti vidljive u boji pijuka, a to je boja safranina. Stoga je lako kategorizirati bakterije u dvije skupine pomoću bojenja po Gramu i dragocjeno je u diferencijaciji i identifikaciji bakterija.
Što je Acid Fast?
Postojanost na kiseline je fizičko svojstvo određenih bakterija, posebno njihova otpornost na obezbojenje kiselinama tijekom postupaka bojenja. Jednom obojeni, ovi organizmi otporni su na postupke dekolorizacije na bazi razrijeđene kiseline i/ili etanola koji su uobičajeni u mnogim protokolima bojenja. Stoga je tim organizmima dano ime 'postni na kiselinu'. Ovo se svojstvo pokazuje zbog visoke razine voštanog materijala (mikolne kiseline) u njihovim staničnim stjenkama. Ovaj test je kritičan za identifikaciju Mycobacterium tuberculosis.
Slika 2: Mikobakterije otporne na kiselinu
Ovu boju otpornu na kiselinu razvio je Paul Ehrlich 1882. Ehrlichovu tehniku otpornu na kiseline modificirao je Ziehl-Neelsen i sada se koristi češće. Postupak bojenja otpornog na kiseline uključuje tri različita reagensa. Carbol fuschin se koristi kao primarna boja. Kiseli alkohol se koristi kao sredstvo za obezbojavanje. Metilen plavo se koristi kao protubojilo. Postupak bojenja izvodi se na sljedeći način.
- Primarna boja (karbol fuksin) nanosi se na fiksirani uzorak na predmetnom stakalcu (sve će stanice biti obojene crvenom bojom).
- Stakalno staklo se zagrijava na pari 5 minuta, čime se mrlje pravilno uvlače u stanice.
- Zatim se dodaje otopina za dekolorizaciju (ovo uklanja crvenu boju iz svih stanica osim bakterija otpornih na kiseline).
- Metilensko plavo se dodaje kao protivbojenje (obojava sve obezbojene bakterijske stanice).
- Bakterije otporne na kiselinu ostaju crvene dok se bakterije otporne na kiselinu boje plavo.
Koje su sličnosti između bojenja po Gramu i Acid Fasta?
- Bojanje po Gramu i Acid fast dvije su različite tehnike bojenja.
- Obje tehnike kategoriziraju bakterije u dvije skupine.
- Obje tehnike koriste dva bojenja i jedno dekoloriranje.
Koja je razlika između bojenja po Gramu i Acid Fasta?
Bojanje po Gramu u odnosu na otpornost na kiselinu |
|
| Bojanje po Gramu je tehnika diferencijalnog bojenja, koja razdvaja bakterije u dvije skupine Gram-pozitivne bakterije i Gram-negativne bakterije. | Acid Fast bojenje je diferencijalno bojenje koje se koristi za identifikaciju organizama otpornih na kiselinu od organizama otpornih na kiseline. |
| Primarna mrlja | |
| Kristalno ljubičasta je najčešće korištena primarna boja u bojanju po Gramu. | Carbol fuksin je primarna boja koja se koristi u postizanju kiselina. |
| Dekolorizirajuće sredstvo | |
| 95% alkohol se koristi kao sredstvo za obezbojavanje kod bojenja po Gramu. | Kiseli alkohol se koristi kao sredstvo za obezbojenje u acid postu. |
| Protiv mrlja | |
| Bojanje po Gramu koristi safranin kao protubojenje. | Bojenje otporno na kiseline koristi metilensko plavo kao protubojilo. |
| Opažanje | |
| Gram negativne bakterije uočavaju se u odabranoj boji, a gram pozitivne u ljubičastoj boji. | Bakterije otporne na kiseline uočene su crvenom bojom, a bakterije otporne na kiseline uočene su plavom bojom. |
Sažetak – Bojenje po Gramu u odnosu na kiselinu
Vizualizacija mikroorganizama u živom stanju je teška. Stoga se biološka bojenja i postupci bojenja intenzivno koriste za proučavanje njihovih svojstava. Diferencijalno bojenje je jedna vrsta tehnike bojenja koja se koristi za razlikovanje bakterija. Bojenje po Gramu i bojenje otporno na kiseline dvije su različite tehnike bojenja. Bojanje po Gramu razlikuje gram negativne bakterije od gram pozitivnih bakterija na temelju debljine njihovih staničnih stijenki. Bojanje otporno na kiseline razlikuje bakterije otporne na kiseline od bakterija otpornih na kiseline na temelju sadržaja mikolne kiseline u staničnoj stijenci. Ovo je razlika između otpornog na kiseline i bojenja po gramu.
Preuzmite PDF verziju Gram Stain vs Acid Fast
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za izvanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. Molimo preuzmite PDF verziju ovdje. Razlika između bojenja po Gramu i brzog uklanjanja kiseline.
