Ključna razlika – bojanje po Gramu u odnosu na kulturu
Bojanje po Gramu je tehnika bojenja koja se provodi kako bi se bakterije razlikovale u dvije skupine prema debljini sloja peptidoglikana u njihovoj staničnoj stijenci. Kultura je metoda uzgoja i održavanja mikroorganizama u laboratorijskim uvjetima za različite analize. Ključna razlika između bojenja po gramu i kulture je njihova funkcija; gram soj tehnika bojenja bakterija gdje je kultura metoda uzgoja i održavanja mikroorganizama.
Što je bojenje po Gramu?
Bojanje po Gramu je važna tehnika diferencijalnog bojenja koja se koristi za identifikaciju bakterija u mikrobiologiji. Ovu je tehniku uveo danski bakteriolog Hans Christian Gram 1884. godine. Bojanje po Gramu kategorizira bakterije u dvije glavne skupine: gram pozitivne i gram negativne; oni su vrlo važni u klasifikaciji i identifikaciji bakterija. Bojanje po Gramu provodi se kao početni korak za karakterizaciju bakterija.
Bakterije su grupirane na temelju razlika u njihovoj staničnoj stijenci. Gram pozitivne bakterije sadrže debeli sloj peptidoglikana u svojoj staničnoj stijenci dok Gram negativne bakterije sadrže tanki sloj peptidoglikana u svojoj staničnoj stijenci kao što je prikazano na slici 01. Ishod bojenja po Gramu temeljit će se na razlici u debljini sloja peptidoglikana stanična stijenka.
Slika 1: Gram pozitivne i gram negativne bakterije
Bojanje po Gramu izvodi se pomoću četiri različita reagensa, naime; primarni bajc, jedkasto sredstvo, sredstvo za dekolorizaciju i kontra bajc. Kristalna ljubičasta i safranin služe kao primarna i protivbojna sredstva, dok gram joda i 95%-tni alkohol služe kao sredstvo za jedkanje i dekolorizator.
Osnovni koraci bojenja po gramima
- Bakterijski bris se priprema na čistom stakalcu, fiksira se toplinom i hladi.
- Razmaz se prelijeva kristalno ljubičastom bojom 1 – 2 minute.
- Razmaz se ispire sporo tekućom vodom iz slavine kako bi se uklonio višak mrlja.
- Gram joda nanosi se na bris 1 minutu.
- Razmaz se ispire sporo tekućom vodom iz slavine
- Razmaz se ispire 95% alkoholom 2 – 5 sekundi i ispire laganom tekućom vodom iz slavine.
- Razmaz se boji safraninom 1 minutu
- Razmaz se ispire sporo tekućom vodom iz slavine, suši i promatra pod mikroskopom.
Na kraju bojenja po Gramu, gram negativne bakterije bit će uočene u ružičastoj boji dok će se gram pozitivne bakterije vidjeti u ljubičastoj boji kao što je prikazano na slici 02. Ishod bojenja po gramima ovisi o debljini sloja peptidoglikana u njihovoj staničnoj stijenci. Tijekom koraka obezbojavanja, primarna mrlja i jedkasto sredstvo lako se uklanjaju s gram negativnih bakterija i postaju bezbojni budući da imaju tanki sloj peptidoglikana. Primarna boja se zadržava u gram pozitivnim bakterijama jer imaju debeli sloj peptidoglikana. Protubojanje neće biti učinkovito za gram pozitivne bakterije zbog zadržavanja primarnog bojenja. Tako će gram pozitivne bakterije biti vidljive u primarnoj boji mrlja, tj. ljubičastoj boji. Protuboja će obojiti gram negativne bakterije i bit će vidljiva u odabranoj boji koja je boja safranina. Stoga je lako kategorizirati bakterije u dvije skupine pomoću bojenja po Gramu i dragocjeno je u diferencijaciji i identifikaciji bakterija.
Slika 2: Gram soj
Što je kultura?
Mikrobna kultura je metoda uzgoja i održavanja mikroorganizama u laboratorijskim uvjetima za različite namjene. Kulture se uzgajaju u čvrstim, polukrutim i tekućim podlogama ovisno o vrsti i svrsi uzgoja mikroorganizama. Kulturama se osiguravaju potrebne hranjive tvari i uvjeti za rast koji su potrebni mikroorganizmima. Postoje različite komponente medija kulture kao što su izvor energije, izvor ugljika, izvor dušika, minerali, mikronutrijenti, voda, sredstvo za skrućivanje itd. Optimalna temperatura, kisik i pH trebaju se prilagoditi prema vrsti mikroorganizma koji se uzgaja.
Postoje različite vrste mikrobnih kultura; na primjer, šaržna kultura, kontinuirana kultura, kultura uboda, kultura agar ploče, kultura bujona itd. Prema sastavu podloge za uzgoj, postoje različite vrste podloga za kulturu poznate kao sintetske podloge, polusintetske podloge i prirodne podloge. Mikrobne kulture pripremaju se u sterilnim uvjetima unutar posebne komore koja se naziva laminarni protok zraka. Medij za uzgoj i stakleno posuđe se steriliziraju prije inokulacije željenog mikroorganizma. U odgovarajućim sterilnim uvjetima ciljni mikroorganizam se prenosi u sterilizirani hranjivi medij i inkubira na optimalnoj temperaturi. Unutar medija, mikroorganizmi će rasti i razmnožavati se pomoću dobivenih hranjivih tvari.
Slika 3: Bakterijska kultura na ploči
Koja je razlika između bojenja po Gramu i kulture?
Bojanje po Gramu u odnosu na kulturu |
|
| Grams soj je tehnika diferencijalnog bojenja koja se koristi za diferencijaciju i identifikaciju bakterija. | Mikrobna kultura je metoda uzgoja mikroorganizama u laboratoriju. |
| Komponente | |
| Ovo koristi različite reagense uključujući dvije boje. | Ovo koristi različite medije kulture kao što su kruti, polučvrsti i tekući mediji koji se sastoje od hranjivih tvari i drugih potrebnih uvjeta. |
| Osnovne funkcije | |
| Ovo omogućuje grupiranje bakterija u dvije skupine: gram negativne i gram pozitivne. | Ovo omogućuje razmnožavanje mikroorganizama za različite svrhe. |
| Baza | |
| Ishod bojenja po Gramu temelji se na razlikama u peptidoglikanskom sloju stanične stijenke. | Mikroorganizmi će rasti i razmnožavati se unutar medija kulture. |
| Ishod | |
| Gram negativne bakterije vidljive su u ružičastoj boji, a gram pozitivne bakterije vidljive su u ljubičastoj boji. | Na pločama se mogu vidjeti kolonije mikroorganizama. Na tekućim medijima mikroorganizmi su u suspendiranom obliku. |
Sažetak – Mrlja po Gramu u odnosu na kulturu
Mikrobne kulture se pripremaju i održavaju u laboratorijskim uvjetima za različite svrhe kao što su skladištenje, testiranje, kemijsko pročišćavanje, itd. Bojenje po Gramu je postupak bojenja kojim se bakterije razlikuju u dvije glavne skupine koje se nazivaju gram negativne bakterije i gram pozitivne bakterije. Dakle, razlika između bojenja po Gramu i kulture je u tome što je bojanje po Gramu tehnika bojenja bakterija dok je kultura metoda uzgoja i održavanja mikroorganizama u laboratorijima.
