Ključna razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena je u tome što je amplifikacija gena proces stvaranja mnogo kopija gena od interesa in vitro lančanom reakcijom polimeraze. No, kloniranje gena je proces stvaranja mnogo kopija gena od interesa in vivo stvaranjem rekombinantnog plazmida i njegovom transformacijom u bakteriju domaćina.
Gen je specifičan fragment DNK koji kodira protein. Organizam posjeduje tisuće gena. Štoviše, moguće je umnožiti sekvence DNA važnih gena pomoću molekularno bioloških tehnika. Umnožavanje gena i kloniranje gena dva su takva postupka. Oba postupka proizvode mnogo kopija gena od interesa. Međutim, postoji razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena u smislu njihove metodologije.
Što je amplifikacija gena?
Amplifikacija gena je proces stvaranja kopija određenog gena pomoću lančane reakcije polimeraze. Za umnožavanje gena, DNK tog određenog organizma treba ekstrahirati korištenjem odgovarajućeg protokola ekstrakcije DNK. Zatim ekstrahiranu dvolančanu DNA treba denaturirati kako bi se dobile odvojene pojedinačne niti. Sljedeći korak uključuje korištenje PCR reakcije za izradu kopija gena od interesa. Nadalje, PCR smjesa sadrži potrebne početnice, nukleotide, enzim DNA polimerazu, šablonsku DNA i druge sastojke. Na kraju PRC programa dolazi do amplifikacije gena od interesa.
Slika 01: Amplifikacija gena
Nadalje, amplifikacija gena početni je korak u detekciji specifične sekvence, identifikaciji organizma, dijagnosticiranju bolesti i izradi genskih biblioteka, itd.
Što je kloniranje gena?
Kloniranje gena je metoda u genetičkom inženjeringu za stvaranje biblioteka gena ili stvaranje mnogo kopija gena od interesa. Ovaj proces uključuje izradu rekombinantnog plazmida i transformaciju rekombinantnog plazmida u stanicu domaćina, posebno bakterijsku stanicu. Klon je identična kopija izvornog organizma ili molekule. Kloniranjem gena mogu se dobiti tisuće klonova gena.
Slika 02: Kloniranje gena
Kad se gen od interesa identificira, može se odvojiti od genoma određenog organizma ograničavanjem specifičnim restrikcijskim enzimima. Zatim pomoću istog restrikcijskog enzima treba otvoriti plazmide (vektore) kako bi se umetnuo fragment gena. Zatim se rekombinantni plazmid transformira u bakteriju domaćina različitim metodama kao što je elektroporacija. Neki od rekombinantnih plazmida ulaze u bakterijske stanice domaćina. Korištenjem antibiotika, transformirane bakterije mogu se odabrati, izolirati i kultivirati u svježem mediju. Dakle, ova tehnika pomaže u dobivanju milijuna klonova gena.
Koje su sličnosti između amplifikacije gena i kloniranja gena?
- Umnožavanje gena i kloniranje gena dvije su molekularno biološke tehnike.
- U obje ove tehnike, određena DNK sekvenca ili gen umnožava se milijun ili tisuće puta.
- Štoviše, obje tehnike su od iznimne važnosti za mnoga znanstvena područja.
Koja je razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena?
Amplifikacija gena je proces koji stvara kopije određenog gena korištenjem in vitro metode koja se zove PCR. S druge strane, kloniranje gena je proces kojim se in vivo metodom stvaraju kopije određenog gena putem konstruiranja rekombinantnih vektora i njihovog umnožavanja u živom organizmu. Dakle, ovo je ključna razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena. Nadalje, amplifikacija gena traje samo nekoliko sati dok kloniranje gena traje nekoliko dana. Stoga i ovo možemo smatrati razlikom između umnožavanja gena i kloniranja gena. Štoviše, proces amplifikacije gena pokazuje manje pogrešaka, dok proces kloniranja gena pokazuje više pogrešaka.
Sljedeća infografika sažima razliku između amplifikacije gena i kloniranja gena.
Sažetak – Amplifikacija gena nasuprot kloniranja gena
Amplifikacija gena je proces stvaranja kopija željenog gena pomoću lančane reakcije polimeraze u in vitro uvjetima dok je kloniranje gena proces stvaranja kopija gena od interesa korištenjem rekombinantne molekule DNK i živog organizma/domaćina bakterija. Dakle, ovo je osnovna razlika između amplifikacije gena i kloniranja gena.
