Ključna razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi je u tome što su radioaktivne sonde jednolančane DNA ili RNA sekvence koje su obilježene radioaktivnim izotopima, dok su neradioaktivne sonde jednolančane DNA ili RNA sekvence koje su označene kemijskom oznakom ili fluorescentna oznaka.
Hibridizacija nukleinskih kiselina je važna tehnika u molekularnoj biologiji, posebno u dijagnostici mikroba. Pomaže u identificiranju ili otkrivanju određene sekvence nukleinske kiseline. U ovoj tehnici, nukleinske kiseline su fiksirane na čvrstu površinu i hibridizirane sa sondom. Proba je fragment DNA ili RNA koji je komplementaran sekvenci od interesa. Ako je ciljna sekvenca prisutna u uzorku, sonda će se hibridizirati s njom i učiniti je detektabilnom. Postoje dvije vrste sondi, radioaktivne i neradioaktivne. Stoga, sonde možemo označiti radioaktivnom oznakom ili fluorescentnom oznakom.
Što su radioaktivne sonde?
Radioaktivne sonde su jednolančani DNA ili RNA fragmenti s radioaktivnom oznakom. Radioizotopi se koriste u pripremi radioaktivnih sondi. Radioizotopi 32P, 33P i 35S obično se koriste u označavanju sondi. Štoviše, radioizotopi 3H i 1251 također se koriste u manjoj mjeri u označavanju sondi. Ali oni se koriste za specifične primjene. Među različitim radioizotopima, 32P je izotop koji se najčešće koristi za označavanje radioaktivnih sondi.
Radioaktivne sonde pružaju viši stupanj pouzdanosti i specifičnosti. Stoga pružaju maksimalnu osjetljivost i omogućuju točnu kvantifikaciju ciljnih sekvenci. Međutim, postoji nekoliko nedostataka povezanih s radioaktivnim sondama. Imaju kratak poluživot. Štoviše, oni su opasni, a proizvodnja, uporaba i odlaganje problematični su pri rukovanju. Osim toga, priprema radioaktivne sonde je skup proces. Stoga, zbog sigurnosnih problema i cijene, radioaktivne sonde se danas ne koriste kao neradioaktivne sonde.
Što su neradioaktivne sonde?
Neradioaktivne sonde druga su vrsta sondi koje su kemijski označene. Digoksigenin je neradioaktivna sonda, koja je marker temeljen na antitijelima. Digoksigeninske sonde su specifične i osjetljive. Biotin je još jedna oznaka koja se koristi u pripremi neradioaktivne sonde. Sustavi za detekciju biotin/streptavidin i digoksigenin/protutijela najčešće su korišteni neradioaktivni testovi u hibridizaciji. Nadalje, sustav peroksidaze hrena još je jedan neradioaktivni sustav sonde. Nakon što se te neradioaktivne sonde hibridiziraju s ciljnim sekvencama, mogu se detektirati autoradiografijom ili drugim tehnikama snimanja.
Slika 01: Hibridizacija s neradioaktivnim sondama
Neradioaktivne sonde se češće koriste u hibridizaciji nukleinskih kiselina nego radioaktivne sonde. To je zato što neradioaktivne sonde nisu povezane s opasnim materijalima. Nadalje, metode neradioaktivne detekcije zahtijevaju kraća vremena izlaganja za otkrivanje hibridizacijskog signala. Međutim, koraci uključeni u hibridizaciju DNA s neradioaktivnim sondama obično su zamorni i dugotrajni. Štoviše, komercijalno dostupna rješenja su skupa.
Koje su sličnosti između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi?
- Radioaktivne i neradioaktivne sonde dvije su vrste sondi koje se koriste u hibridizaciji nukleinskih kiselina.
- Olakšavaju detekciju ciljnih sekvenci u uzorku.
- Obje vrste sondi jednako su osjetljive i specifične.
Koja je razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi?
Radioaktivne sonde su jednolančane DNA ili RNA sekvence označene radioaktivnim izotopima, dok su neradioaktivne sonde jednolančane DNA ili RNA sekvence označene kemijskom oznakom. Dakle, ovo je ključna razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi. Također, radioaktivni izotopi su opasni. Stoga su radioaktivne sonde znatno opasne, dok neradioaktivne nisu opasne.
Štoviše, još jedna razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi su njihovi nedostaci. Kratki poluživoti i opasnosti povezane s njihovom proizvodnjom, uporabom i odlaganjem nedostaci su korištenja radioaktivnih sondi. S druge strane, koraci uključeni u hibridizaciju DNA s neradioaktivnim sondama obično su zamorni i dugotrajni.
U nastavku infografika prikazuje više usporedbi vezanih uz razliku između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi.
Sažetak – Radioaktivne naspram neradioaktivnih sondi
Sonda je fragment DNA ili RNA koji sadrži sekvencu nukleotida koja je komplementarna sekvenci od interesa. Kako bi se otkrila ciljna sekvenca, sonde se mogu obilježiti radioaktivno, fluorescentno ili kemijski. Probe se vežu s komplementarnim sekvencama u uzorku. Radioaktivne sonde obilježene su radioaktivnim izotopima, dok su neradioaktivne sonde obilježene biotinom, digoksigeninom ili peroksidazom hrena. Dakle, ovo je ključna razlika između radioaktivnih i neradioaktivnih sondi.
