Ključna razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa je u tome što kolorimetrijski test određuje koncentraciju obojenih spojeva u otopini dok fluorometrijski test određuje kinetički mehanizam otopine.
Biokemijski test je tehnika koja analitički otkriva ili kvantificira aktivnost biološke molekule ili tvari. To je in vitro proces. Kolorimetrijski test i fluorometrijski test dvije su vrste uobičajenih biokemijskih testova koji se provode u laboratorijima. Višestruke tehnike kao što su ELISA i western blotting također su složeni biokemijski testovi za kvantifikaciju metaboličke aktivnosti i mjerenje funkcionalnog ponašanja biomolekula kao što su proteini, enzimi i druge male molekule. Ove vrste analiza koriste se za identifikaciju interakcija protein-DNA, protein-RNA i protein-protein.
Što je kolorimetrijski test?
Kolorimetrijski test je tehnika koja određuje koncentraciju obojenih spojeva u otopini. Drugim riječima, kolorimetrijski test je reakcija koja dovodi do promjene boje zbog enzimske ili kemijske reakcije između reagensa i analita. Kolorimetrijski testovi prakticiraju se u biokemiji za testiranje enzima, specifičnih spojeva, hormona, antitijela i drugih analita. Koriste kolorimetre ili spektrofotometre. Kolorimetri su instrumenti koji karakteriziraju obojene uzorke kako bi se dobila objektivna mjera karakteristika boje. Spektrofotometar je uređaj koji mjeri intenzitet svjetlosti kao funkciju boje ili valne duljine svjetlosti.
Slika 01: Kolorimetrijski test
Kako radi kolorimetrijski test?
U kolorimetrijskom testu priprema se ploča s određenim antitijelom vezanim za jažice. Zatim se dodaje uzorak. To može omogućiti da se uzorak veže za antitijelo. Zatim se u jažice dodaju detekcijsko protutijelo i supstrat za reakciju s detekcijskom sondom. Stop otopina se dodaje na kraju prije očitanja. Prazna jažica koja se naziva slijepa proba ostaje bez uzorka. U kolorimetrijskom ispitivanju, što je boja tamnija, veća je koncentracija analita. Obično je za očitanje potrebna samo jedna valna duljina. Ali ako postoji referentno mjerenje, koriste se dvije ili više valnih duljina.
Što je fluorometrijski test?
Fluorometrijski test je tehnika koja određuje kinetički mehanizam enzimskih reakcija. Fluorometrijski test se odvija stvaranjem fluorescentnog produkta iz nefluorescentnog supstrata ili obrnuto. Ovaj test također koristi prijenos energije fluorescentne rezonancije (FRET) gdje enzimska reakcija mijenja položaj dvaju fluorofora u supstratu, čime se mijenja intenzitet fluorescencije.
Slika 02: Fluorometrijski test
Fluorometrijski testovi općenito su puno osjetljiviji od ostalih testova. Dijagnostičke procjene enzima u uzorcima tkiva, stanica ili tekućine pacijenata povećavaju se zbog veće osjetljivosti.
Kako radi fluorometrijski test?
U fluorometrijskom testu, supstrat se dodaje uzorku u ploči, a fluorescentni odgovor se uzima pomoću čitača ploča. Ovdje se svaka ćelija mjeri zasebno. U fluorometrijskim ispitivanjima koriste se neprozirne ploče. Time se smanjuje raspršenje svjetlosti. Za ovu vrstu testa potrebne su dvije valne duljine. Jedna valna duljina je za otkrivanje ekscitacije, a druga valna duljina je za emisiju.
Koje su sličnosti između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa?
- Kolorimetrijski test i fluorometrijski test dvije su vrste biokemijskih testova.
- Oba testa se provode za medicinsku dijagnostiku.
- Ovi testovi uključuju enzimsku reakciju.
- Oba testa uključuju supstrat i analite.
Koja je razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa?
Kolorimetrijski test je tehnika koja određuje koncentraciju obojenih spojeva u otopini, dok je fluorometrijski test tehnika koja određuje kinetički mehanizam enzimskih reakcija. Dakle, ovo je ključna razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa. Štoviše, fluorometrijski testovi su osjetljiviji od kolorimetrijskih testova; stoga fluorometrijski testovi imaju sposobnost detektiranja više analita. Dakle, ovo je još jedna važna razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa. Nadalje, fluorometrijski testovi zahtijevaju dvije valne duljine, dok se kolorimetrijski testovi provode s jednom valnom duljinom.
Infografika u nastavku prikazuje više razlika između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa.
Sažetak – kolorimetrijski naspram fluorometrijskog testa
Biokemijski test je analitički proces koji se koristi za određivanje i kvantificiranje staničnih metaboličkih reakcija. Kolorimetrijski test i fluorometrijski test dvije su vrste biokemijskih testova. Kolorimetrijski test je reakcija koja dovodi do promjene boje zbog enzimske ili kemijske reakcije između reagensa i analita, dok je fluorometrijski test tehnika koja se koristi za određivanje kinetičkog mehanizma enzimskih reakcija. Oba testa ovise o enzimskoj reakciji koja uključuje supstrat i analit. Fluorometrijski testovi su osjetljiviji od kolorimetrijskih testova. Ono što je najvažnije, fluorometrijski testovi zahtijevaju dvije valne duljine, dok se kolorimetrijski testovi mogu provesti sa samo jednom valnom duljinom. Dakle, ovo sažima razliku između kolorimetrijskog i fluorometrijskog testa.
