Transformacija vs Transfekcija
Transformacija i transfekcija dvije su jednostavne tehnike koje se koriste za uvođenje stranog gena u stanicu domaćina. Međutim, ove tehnike ovise o vrsti hosta ili vektorskih sustava.
Što je transformacija stanica?
Transformacija je tehnika koja se koristi za uvođenje gena u stanice kvasca i bakterija. Ova tehnika obično uzrokuje nasljedne promjene u genima, pa je ekspresija gena trajna. Bakterijsku transformaciju prvi je uveo Frederick Griffith 1928. Potom je ranih 1970-ih ova tehnika korištena u E.coli. Tijekom procesa transformacije E. coli, stanice se natapaju u ledeno hladnu otopinu CaCl2 Ovaj korak čini stanice E.coli kompetentnima. Nakon toga se kompetentne stanice pomiješaju s plazmidnom DNA i inkubiraju na ledu 20-30 min. Zatim se daje kratki toplinski šok kako bi se omogućio prijenos DNK u stanicu. Na kraju, stanice se stave u hranjivi bujon i inkubiraju na 37 °C tijekom 60-90 minuta kako bi se ustanovili plazmidi. Nakon što su ovi koraci uspješno završeni, transformirane stanice mogu se staviti na odgovarajući medij za razmnožavanje stanica. Budući da se transformacija smatra neučinkovitom tehnikom, ne može se koristiti za pripremu banaka klonova.
Što je transfekcija stanica?
Transfekcija je metoda uvođenja stranog gena, obično, u stanice sisavaca. Postoje dvije metode transfekcije; naime, prolazna transfekcija i stabilna transfekcija. Kod prolazne transfekcije, ekspresija gena dostupna je ograničeno vrijeme; dakle, promjena gena uzrokuje privremenu ekspresiju. Ova metoda transfekcije je jednostavna i brza; stoga se može koristiti rutinski. Jedan nedostatak prolazne transfekcije je poteškoća u primjeni za velike sustave sinteze proteina.
Tijekom stabilne transfekcije, ciljni gen je integriran u genom stanice domaćina, pa je ekspresija gena trajna, za razliku od prolazne transfekcije.
Koja je razlika između transformacije i transfekcije?
• Transformacija je uvođenje gena u prokariotsku stanicu (bakterijsku i gljivičnu), dok se transfekcija obično naziva uvođenje gena u stanicu sisavca.
• Transformacija rezultira nasljednim promjenama u genima, dok transfekcija može rezultirati ili privremenom ekspresijom ili trajnim promjenama u genima.
