Ključna razlika – CFU naspram MPN
Jedinica koja stvara kolonije (CFU) i najvjerojatniji broj (MPN) dvije su metode koje se koriste za prebrojavanje mikroorganizama u uzorcima. Oba se parametra koriste za otkrivanje kvalitete vode i fekalnih indikatorskih bakterija u uzorcima vode. Jedinica za stvaranje kolonija je mjera koja se koristi za brojanje broja održivih bakterijskih stanica ili gljivičnih stanica u specifičnom volumenu ili težini određenog uzorka. Standardna jedinica za ovaj parametar je CFU/ml ili CFU/g. Najvjerojatniji broj je druga jedinica koja se koristi za mjerenje broja održivih bakterijskih stanica u tekućem uzorku. Ključna razlika između CFU i MPN je u tome što se CFU izračunava iz bakterijskih i gljivičnih kolonija koje rastu na ploči čvrstog agara, dok se MPN izračunava iz živih bakterija koje rastu u tekućem mediju.
Što je CFU?
Jedinica koja stvara kolonije (CFU) je parametar koji mjeri broj održivih bakterijskih ili gljivičnih stanica u danom uzorku. Metoda kojom se broje jedinice koje tvore kolonije naziva se standardnim brojem ploča. Vijabilne kolonije koje se pojavljuju na agar pločama izražene su kao CFU po 1 ml (jedinica koja stvara kolonije po mililitru) uzorka za tekućine ili CFU po 1 g (jedinica za stvaranje kolonija po jednom gramu) uzorka za krute tvari.
Postoje dvije uobičajene metode koje se koriste za mjerenje CFU u uzorku. To su metoda raširene ploče i metoda izlivene ploče. Ove dvije metode podržane su tehnikom koja se naziva serijsko razrjeđivanje. Serijski razrijeđeni uzorci omogućuju dobivanje izbrojivog broja kolonija na površini agara. Poznati volumen uzorka može se rasporediti po površini agar ploče ili pomiješati s agarom i izliti na ploču. Ploča se zatim inkubira, a nastale kolonije se broje. Broj kolonija odnosi se na broj mikroorganizama unutar izvornog uzorka. Ploče koje pokazuju previše ili premalo kolonija isključene su iz brojanja jer rezultati možda neće biti statistički točni na tim pločama. Statistički, najbolji raspon je 30 – 300 kolonija na agar ploči. Stoga treba odabrati ispravne ploče za točno nabrajanje. Za gornju funkciju provodi se serijsko razrjeđivanje.
Nakon što izbrojite broj živih kolonija na pločicama, CFU/ml se može izračunati pomoću sljedeće jednadžbe.
CFU po ml originalnog uzorka=broj kolonija na ploči X faktor razrjeđenja
Faktor razrjeđivanja=(1/ Razrjeđivanje ploče)
Na primjer, ako dobijete 149 kolonija na ploči razrjeđenja 10-4, tada se broj bakterija u 1 ml originalnog uzorka može izračunati na sljedeći način:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 ili 1490000
=1. 49 x 106
Slika 01: Jedinica za formiranje kolonija
Što je MPN?
Najvjerojatniji broj je alternativna mjera CFU/ml. MPN također procjenjuje održive stanice u tekućem uzorku. Ona broji organizme koji rastu u tekućoj kulturi i pretežno je bakteriološka tehnika. Ova metoda je osobito korisna za uzorke koji sadrže niske koncentracije bakterijskih stanica; na primjer, mlijeko, pitka voda itd. MPN vrijednost se izražava za 100 ml volumena. MPN se oslanja na statističku metodu temeljenu na teoriji vjerojatnosti. Postoje statističke tablice za pronalaženje MPN vrijednosti po 100 ml uzorka. Ove tablice prikazuju rezultate s granicama pouzdanosti od 95%.
MPN vrijednost izračunava se nakon izvođenja tehnike koja se naziva metoda fermentacije u više cijevi. Tri kompleta epruveta koje sadrže odgovarajući medij kulture inokuliraju se s tri različita volumena uzorka kao što su 10 ml, 1 ml i 0.1 ml i inkubirati za rast. Nakon perioda inkubacije, epruvete se boduju + (pozitivno) ili – (negativno) za prisutnost ili odsutnost rasta. Uzorak pozitivnih i negativnih rezultata zatim se uspoređuje s MPN tablicom statističkih vjerojatnosti kako bi se procijenio broj mikroorganizama. Zatim se daje MPN vrijednost za 100 ml uzorka. MPN se široko koristi za otkrivanje koliformnih bakterija prisutnih u uzorcima vode.
Slika 02: MPN tablica
Koja je razlika između CFU i MPN?
CFU vs MPN |
|
| CFU je mjera koja se koristi za izražavanje broja održivih bakterijskih ili gljivičnih kolonija u danom uzorku. | MPN je alternativna mjera za CFU i mjeri broj održivih bakterijskih stanica u tekućem uzorku. |
| Jedinica | |
| CFU/ml ili CFU/g | MPN/100 ml |
| Izračun | |
| CFU se izračunava prebrojavanjem broja kolonija naraslih na agar pločama. | MPN se izračunava usporedbom pozitivnih i negativnih uzoraka cijevi s MPN statističkom tablicom. |
| Tehnika serijskog razrjeđivanja | |
| Serijsko razrjeđivanje se izvodi prije stavljanja uzoraka na agar ploče. | Serijsko razrjeđivanje se obično ne provodi kada se izračuna MPN |
| Metode | |
| Metoda raširene ploče i metoda izlijevanja dvije su vrste metoda koje se izvode za dobivanje CFU. | Vermentacija u više cijevi je metoda koja se provodi za dobivanje MPN vrijednosti. |
Sažetak – CFU vs MPN
Mjerenje rasta mikroba potrebno je iz mnogo razloga. U pogonima za preradu hrane potrebno je mjeriti razinu i vrstu mikroorganizama u hrani. U prehrambenoj industriji i medicini potrebno je osigurati učinkovitu primjenu postupaka sterilizacije. U postrojenjima za pročišćavanje otpadnih voda potrebno je rutinski mjeriti broj mikroba. Kod optimizacije postupka u molekularnoj biologiji potrebno je mjeriti broj kolonija na pločicama. Stoga su dostupne različite metode prebrojavanja i mjerenja rasta. CFU i MPN dvije su takve metode široko prihvaćene u raznim područjima. CFU je mjera broja održivih bakterijskih i gljivičnih kolonija prisutnih u danom uzorku. Izračunava se standardnom metodom brojanja ploča ili metodom brojanja održivih ploča. MPN je još jedna mjera koja izražava broj bakterijskih stanica prisutnih u određenom volumenu tekućeg uzorka. Izračunava se pomoću metode fermentacije u više cijevi i MPN tablice. Ovo je razlika između CFU i MPN.
Preuzmi PDF verziju CFU vs MPN
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za izvanmrežne svrhe prema bilješkama o citatima. Ovdje preuzmite PDF verziju. Razlika između CFU i MPN.
