Ključna razlika između kompetitivne i nekompetitivne ELISA-e je u tome što kompetitivna ELISA koristi inhibicijski antigen dok nekompetitivna ELISA ne koristi inhibicijski antigen za analizu.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) imunološki je test koji otkriva različite mete kao što su antitijela, antigeni, proteini i glikoproteini. To je brza i jednostavna metoda za izvođenje. Stoga se češće koristi u istraživačke i dijagnostičke svrhe. ELISA uključuje upotrebu enzima i specifično vezanje antitijela i antigena. Ovisno o tome kako se reakcije odvijaju, postoje četiri vrste ELISA-e: izravna ELISA, neizravna ELISA, sendvič ELISA i inhibicijska ELISA. Izravna, neizravna i sendvič ELISA vrste su nekompetitivne ELISA-e, dok je inhibicijska ELISA vrsta potpune ELISA-e. Glavni cilj ovog članka je raspraviti razliku između konkurentne i nekompetitivne ELISA.
Što je kompetitivni ELISA?
Kompetitivni ELISA mjeri koncentraciju antigena u uzorku detekcijom interferencije signala. Ovdje se analiza koristi inhibitornim antigenom. Dakle, to je vrsta inhibicije ELISA. Tijekom ovog postupka, antigeni prisutni u uzorku natječu se s odabranim referentnim antigenom za vezanje na određenu količinu obilježenog antitijela. Nadalje, ovaj postupak započinje inkubacijom uzorka, s viškom obilježenog antitijela. Također, referentni antigen treba prethodno nanijeti na ploču za analizu s više jažica. Zatim se mješavina uzorka treba dodati na ploču za ispitivanje koja sadrži referentni antigen. Slobodna protutijela će se vezati na referentni antigen ovisno o količini antigena u uzorku. Stoga, ako je prisutno više antigena uzorka, detektirati će se manje referentnog antigena. Stoga stvara slabiji signal.
Slika 01: ELISA
Nasuprot tome, kada uzorak sadrži manju količinu antigena, sve više i više referentnog antigena će zauzeti antitijela i dati jak signal. Budući da kompetitivni ELISA daje jači signal kada uzorak sadrži malu količinu antigena, kompetitivni ELISA je vrlo osjetljiv test, čak i za uzorke s malim brojem antigena.
U nekim kompetitivnim ELISA kompletima, umjesto označenog antitijela koristi se označeni antigen. Ovdje će se označeni antigen i antigen uzorka natjecati za vezanje na primarno antitijelo. Slično tome, kada je količina antigena u uzorku niska, količina obilježenog antigena koji se veže na antitijela bit će veća i stvara jači signal.
Što je nekonkurentna ELISA?
Među četiri vrste ELISA-e, tri su vrste nekompetitivne ELISA-e. To su izravna ELISA, neizravna ELISA i sendvič ELISA. Sva tri formata rade prema zajedničkom principu ELISA testa s malim razlikama u svojim metodologijama.
Direct ELISA koristi primarno antitijelo označeno enzimom. Stoga nije potrebno sekundarno antitijelo. Stoga je izravna ELISA brža od ostalih vrsta ELISA. Primarno protutijelo izravno će se vezati na imobilizirani ciljni antigen koji je prisutan u ploči. Stoga će se odvijati reakcija enzim-supstrat, stvarajući vidljiv signal.
Slika 02: Sendvič ELISA
Za razliku od izravne ELISA, neizravna ELISA koristi neobilježeno primarno protutijelo i enzimom označeno sekundarno protutijelo. Nakon što se primarno antitijelo veže za imobilizirani antigen, sekundarno antitijelo veže se za primarno antitijelo. Enzim u sekundarnom protutijelu reagirat će s antigenom i proizvesti vidljiv signal. Sendvič ELISA razlikuje se od izravne i neizravne ELISA. Ovdje je antitijelo imobilizirano na stijenku ploče za ispitivanje.
Koje su sličnosti između konkurentne i nekompetitivne ELISA?
- Kompetitivni i nekompetitivni ELISA dvije su vrste tehnika imunoanalize.
- To su vrlo fleksibilne i osjetljive tehnike.
- Nadalje, i kompetitivni i nekompetitivni ELISA su enzimski imunotestovi.
- Također, obje metode generiraju signal zbog reakcije enzim-supstrat.
Koja je razlika između konkurentne i nekompetitivne ELISA?
Kompetitivni ELISA je vrsta ELISA-e koja se oslanja na dovršetak između antigena analita i obilježenog antigena za ograničenu količinu specifičnog antitijela. S druge strane, ne postoji takvo natjecanje između antigena od interesa i referentnog antigena u nekompetitivnoj ELISA. Dakle, ovo je ključna razlika između konkurentne i nekompetitivne ELISA-e. Slično, kompetitivna ELISA je inhibicijska ELISA dok nekompetitivna ELISA nije inhibicijska ELISA. Dakle, ovo je također razlika između konkurentne i nekompetitivne ELISA.
Štoviše, konkurentna ELISA prikladnija je za mjerenje male količine antigena od interesa. To je osjetljiva metoda. S druge strane, nekompetitivni ELISA ne ovisi o broju antigena prisutnih u uzorku. Dakle, ovo je također razlika između konkurentne i nekompetitivne ELISA.
U nastavku infografika usporedno objašnjava razliku između konkurentne i nekompetitivne ELISA.
Sažetak – kompetitivni protiv nekompetitivnog ELISA
Kompetitivni i nekompetitivni ELISA dvije su glavne vrste ELISA ili enzimski vezanih imunoanaliza. U sažetku razlike između kompetitivne i nekompetitivne ELISA-e, kompetitivna ELISA se oslanja na kompeticiju između antigena od interesa i referentnog antigena prema ograničenoj količini antitijela. Stoga se kompetitivni ELISA također naziva i inhibicijski ELISA. S druge strane, nekompetitivni ELISA ne oslanja se na natjecanje između ciljnih i referentnih antigena. Koristi višak označenog specifičnog antitijela prema analitu od interesa. Dakle, ovo je ključna razlika između konkurentne i nekompetitivne ELISA-e. Izravna ELISA, neizravna ELISA i sendvič ELISA tri su glavne vrste nekompetitivne ELISA.
