Ključna razlika između izokratske i gradijentne elucije je u tome što se izokratska elucija odnosi na održavanje konstantne koncentracije u mobilnoj fazi, dok se gradijentna elucija odnosi na održavanje različite koncentracije u mobilnoj fazi.
U kromatografiji se koriste izrazi izokratska i gradijentna elucija. Tijekom kromatografskog ciklusa koristimo stacionarnu fazu, koja je nepomična tvar, zajedno s mobilnom fazom, pokretnom tvari. Izokratsko i gradijentno ispiranje opisuje svojstva mobilne faze.
Što je izokratska elucija?
Izokratska elucija je termin koji se koristi u kromatografiji kada mobilna faza ima konstantnu koncentraciju. Ovdje je koncentracija mobilne faze konstantna tijekom kromatografskog procesa. U ovom procesu možemo promatrati kako se širina vrha linearno povećava s vremenom zadržavanja u kromatogramu. Međutim, to dovodi do nedostatka – vrhovi kasnog eluiranja za kasno eluiranje postaju vrlo ravni i široki. Stoga je te široke vrhove teško prepoznati kao vrhove.
Štoviše, u izokratskom eluiranju selektivnost se ne mijenja prema dimenzijama kolone. To znači da selektivnost ne ovisi o promjenama dimenzija stupca. Ovdje se duljina i promjer smatraju dimenzijama stupca. Stoga se vrhovi eluiraju istim redoslijedom.
Što je Gradient Elution?
Gradijentna elucija je termin koji se koristi u kromatografiji kada ovdje mobilna faza ima promjenjivu koncentraciju. Drugim riječima, koncentracija mobilne faze ne mora ostati konstantna. Na primjer, u HPLC-u, uobičajena metoda odvajanja koristi metanol 10% na početku i završava na 90%, postupnim povećanjem koncentracije. Mobilna faza ima dvije komponente: slabo otapalo i jako otapalo. Slabo otapalo omogućuje sporo eluiranje otopljene tvari, dok jako otapalo uzrokuje brzo eluiranje otopljene tvari. U reverzno faznoj kromatografiji koristimo vodu kao slabo otapalo, a organsko otapalo kao jako otapalo.
Slika 01: HPLC
Štoviše, metoda gradijentnog eluiranja smanjuje komponente koje se kasnije eluiraju kako bi brže eluirale, dajući uzak vrh u kromatogramu. Ova metoda poboljšava oblik vrha i visinu vrha također. Nadalje, u tehnici gradijentnog eluiranja, redoslijed eluiranja se mijenja s promjenama dimenzija stupca.
Koja je razlika između izokratske i gradijentne elucije?
U kromatografiji se koriste izrazi izokratska i gradijentna elucija. Izokratska i gradijentna elucija opisuju svojstva mobilne faze. Ključna razlika između izokratske i gradijentne elucije je u tome što se izokratska elucija odnosi na održavanje konstantne koncentracije u mobilnoj fazi, dok se gradijentna elucija odnosi na održavanje različite koncentracije u mobilnoj fazi.
U tehnici izokratske elucije, širina vrha linearno raste s vremenom zadržavanja. Međutim, u tehnici gradijentnog eluiranja, zadržavanje komponenti koje se kasnije eluiraju je smanjeno, tako da eluiranje postaje brže i daje uske vrhove. Osim toga, u izokratskoj eluciji selektivnost ne ovisi o dimenzijama kolone, ali u gradijentnoj eluciji selektivnost se mijenja s promjenom dimenzija kolone.
Sljedeća tablica sažima razliku između izokratske i gradijentne elucije.
Sažetak – Isokratska vs gradijentna elucija
Izokratska elucija i gradijentna elucija opisuju svojstva mobilne faze. Ključna razlika između izokratske i gradijentne elucije je u tome što se izokratska elucija odnosi na održavanje konstantne koncentracije u mobilnoj fazi, dok se gradijentna elucija odnosi na održavanje različite koncentracije u mobilnoj fazi.
