Ključna razlika između gel filtracije i afinitetne kromatografije je u tome što gel filtracijska kromatografija ovisi o razlikama u molekularnoj težini ili veličini uzorka analita, dok afinitetna kromatografija ovisi o afinitetu analita prema imobiliziranom ligandu.
Pojam kromatografija u analitičkoj kemiji odnosi se na proces odvajanja komponenti u smjesi pomoću različitih tehnika. Kromatografija je skupni naziv koji predstavlja različiti broj različitih metoda za razdvajanje.
Što je gel filtracijska kromatografija?
Gel filtracijska kromatografija je analitička tehnika u kojoj odvajanje komponenata ovisi o razlici u molekularnoj težini ili veličini. Ova tehnika je također poznata kao kromatografija isključivanja veličine ili kromatografija molekularnog sita. Tehnika odvajanja u ovom procesu ovisi o različitoj sposobnosti molekula u uzorku da uđu u pore medija za gel-filtraciju.
U tehnici gel filtracije, stacionarna faza sadrži kuglice hidratiziranog, spužvastog materijala s porama molekularnih dimenzija koje sadrže uski raspon veličina. Ako vodenu otopinu koja se sastoji od molekula različitih veličina propustimo kroz kolonu koja sadrži ta "molekularna sita", molekule koje su veće od pora medija za filtriranje brzo se kreću kroz kolonu. Nasuprot tome, manje molekule ulaze u pore gela i nastoje se polako kretati kroz kolonu. Molekule eluiraju iz kolone redoslijedom smanjenja veličine molekula. Ovdje je granica isključenja gela molekularna masa najmanjih molekula koje ne mogu prodrijeti kroz pore određenog gela.
Postoje različite vrste tehnika gel filtracije, kao što je indirektna metoda gel filtracije, gel filtracija u stanju ravnoteže, dijaliza gel kuglicama, itd. Neizravna gel filtracijska kromatografija korisna je u određivanju slobodnih hormona štitnjače. Kromatografija s gel filtracijom u stabilnom stanju neizravna je tehnika korisna uglavnom za mjerenje slobodnih steroida poput kortizola, testosterona itd. Dijaliza s gel kuglicama je, s druge strane, modifikacija gel filtracije u stabilnom stanju koja je relativno jednostavnija.
Što je afinitetna kromatografija?
Afinitetna kromatografija je analitička tehnika i metoda odvajanja koja ovisi o specifičnoj veznoj interakciji između imobiliziranog liganda i njegovog veznog partnera. Neki primjeri uključuju vezanje antitijelo-antigen, vezanje enzim-supstrat i vezanje enzim-inhibitor. Stoga ova tehnika ima mnoge važne primjene u pročišćavanju nukleinskih kiselina, pročišćavanju proteina iz staničnih ekstrakata i pročišćavanju krvi.
U ovoj tehnici, najvažnije svojstvo je imobilizacija liganda. Za to možemo koristiti različite materijale kao što su akrilati i silikagel. Važno je spriječiti steričku interferenciju ciljne molekule s ligandom. Štoviše, inhibitor je vezan za čvrstu fazu. Taj inhibitor nazivamo razmaknica. Klasično, razmaknica se sastoji od lanca ugljikovodika.
Stacionarna faza afinitetne kromatografije sadrži jezgru, razmaknicu i ligand. Ponekad također ima metalni ion koji je povezan s ligandom. Najpoželjnija čvrsta faza za stacionarnu fazu u ovoj tehnici je agarozni gel jer se lako raspršuje za punjenje i pakiranje kolone slojevima smole bilo koje veličine, a dovoljno je velik da biomolekule slobodno teku u i kroz kuglice. Ligandi se mogu kovalentno vezati za polimer kuglice na različite načine. Najčešći razmaknički spojevi su cijanogen bromid, epoksid, epoksid s C6 kiselinom i diamin. S druge strane, ligand koji možemo koristiti razlikuje se prema meti, npr. antitijelo-antigen, ioni željeza ili aluminija-fosfoproteini, avidin-biotin, glutation-GST, kelator-His-označeni proteini, itd.
Koja je razlika između gel filtracije i afinitetne kromatografije?
Kromatografija je važna analitička tehnika. Gel filtracijska kromatografija i afinitetna kromatografija dvije su važne varijacije kromatografije. Ključna razlika između gel filtracije i afinitetne kromatografije je u tome što gel filtracijska kromatografija ovisi o razlikama u molekularnoj težini ili veličini uzorka analita, dok afinitetna kromatografija ovisi o afinitetu analita prema imobiliziranom ligandu.
Sažetak – Gel filtracija nasuprot afinitetnoj kromatografiji
Postoje različite vrste kromatografskih tehnika prema njihovoj primjeni i prirodi uzorka analita. Gel filtracija i afinitetna kromatografija dvije su takve vrste tehnika. Ključna razlika između gel filtracije i afinitetne kromatografije je u tome što gel filtracijska kromatografija ovisi o razlikama u molekularnoj težini ili veličini uzorka analita, dok afinitetna kromatografija ovisi o afinitetu analita prema imobiliziranom ligandu.
