Ključna razlika – nitroceluloza naspram najlonske membrane
Upijanje je važna tehnika za otkrivanje specifičnih sekvenci DNA, RNA i proteina iz njihovih mješavina u molekularnoj biologiji. To se radi pomoću membrane koja se zove blot. Postoje različite tehnike upijanja kao što su Northern, Southern i Western blotting. Odabir odgovarajuće membrane za postupak upijanja treba pažljivo obaviti kako bi se spriječilo nespecifično vezanje i pogrešna detekcija. Nitroceluloza, najlon i PVDF često su korištene membrane u tehnikama upijanja. Imaju različite karakteristike. Ključna razlika između nitrocelulozne i najlonske membrane je u tome što nitrocelulozne membrane imaju visok potencijal imobilizacije proteina, dok najlonske membrane imaju visok potencijal imobilizacije nukleinske kiseline. Međutim, obje vrste membrana često se koriste u tehnikama upijanja.
Što je nitrocelulozna membrana?
Nitrocelulozna membrana često je korišteni membranski filtar u tehnikama upijanja nukleinske kiseline i proteina. Ima visok potencijal vezanja za proteine. Stoga se nitrocelulozne membrane naširoko koriste u western blotting tehnici. Nitrocelulozne membrane su kompatibilne sa svim hibridizacijskim tehnikama i pokazuju vrhunske kapacitete vezanja bez smetnji. Nitrocelulozne membrane su prirodno hidrofilne prirode. Oni ostvaruju hidrofilnu interakciju s molekulama i učinkovito ih imobiliziraju na membranu. Komercijalne nitrocelulozne membrane dostupne su u dvije veličine pora: 0,45 i 0,2 µm.
Slika 01: Nitrocelulozna membrana korištena u Western blottingu
Što je najlonska membrana?
Najlonska membrana još je jedna vrsta komercijalne membrane koja se koristi u tehnikama upijanja. Alternativno se koristi s nitroceluloznim membranama za južno i sjeverno upijanje. Najlonske membrane su idealne za Southern blotting od nitroceluloze zbog svog velikog afiniteta za vezanje s DNA. Zbog nekoliko jedinstvenih karakteristika najlonskih membrana, istraživači obično koriste najlonske membrane za južno i sjeverno upijanje umjesto preko nitroceluloznih membrana. Najlonske membrane također se preporučuju za skidanje i ponovno ispitivanje, za razliku od nitroceluloze.
Slika 02: Najlonska membrana korištena za Southern blotting
Koja je razlika između nitrocelulozne i najlonske membrane?
Nitroceluloza naspram najlonske membrane |
|
| Nitrocelulozne membrane su krte. | Najlonske membrane su manje lomljive. |
| Rukovanje | |
| Teško ih je nositi. | Lako im je rukovati. |
| Ponavljanje | |
| Nepodržane nitrocelulozne membrane teško je ponovno ispitati. | Ponovno ispitivanje je jednostavno s najlonskim membranama. |
| Kompatibilnost s različitim uvjetima pohrane | |
| Nitrocelulozne membrane imaju manju čvrstoću da izdrže različite uvjete skladištenja. | Najlonske membrane robusnije reagiraju na različite uvjete skladištenja. |
| Koristi | |
| Potrebno je prethodno vlaženje. | Prethodno vlaženje nije potrebno za najlonske membrane. |
| Hidrofilna priroda | |
| Nitrocelulozne membrane su hidrofilne prirode, ali su manje hidrofilne od najlonskih membrana. | Izrazito su hidrofilne prirode. |
| Potencijal imobilizacije | |
| Nitrocelulozne membrane imaju manji afinitet za nukleinske kiseline. Ali ima veliki afinitet za proteine. | Najlonske membrane imaju visok potencijal vezivanja s nukleinskim kiselinama od nitroceluloznih membrana. |
Sažetak – Nitroceluloza naspram najlonske membrane
Nitrocelulozne i najlonske membrane posebni su listovi koji se koriste u tehnici upijanja za reprodukciju trakastog uzorka na gelu. Omogućuju mogućnost detekcije određene sekvence ili proteina iz smjesa imobilizacijom na membrani. Jednom kada se molekule imobiliziraju na membrani, ona se može koristiti kao supstrat za hibridizacijsku analizu s obilježenim probama. Nitrocelulozna membrana se obično koristi za detekciju proteina u western blotting tehnici zbog svog visokog afiniteta vezanja s proteinima. Najlonske membrane često se koriste za južno i sjeverno upijanje. Ovo je razlika između nitrocelulozne i najlonske membrane.
