Ključna razlika između BL21 i DH5 Alpha je u tome što je BL21 genetski modificirana kompetentna stanica E. coli s nedostatkom proteaze koja se prvenstveno koristi za ekspresiju proteina, dok je DH5 Alpha genetski modificirana kompetentna stanica E. coli s mutacijom recA1 koja se primarno koristi za transformaciju plazmida.
E. coli je jedan od poznatih organizama izbora za rekombinantnu proizvodnju proteina. Tijekom godina postao je najpopularnija platforma za izražavanje. Također se koristi kao tvornica ćelija. BL21 i DH5 Alpha dvije su genetski modificirane stanice E. coli koje se trenutno koriste za ekspresiju proteina i transformaciju plazmida.
Što je BL21?
BL21 je genetski modificirana kompetentna stanica E.coli s nedostatkom proteaze koja se prvenstveno koristi za ekspresiju proteina. E. coli BL21 je bakterijska stanica izvedena iz soja B. Ima defekte Lon proteaze i ompT proteaze vanjske membrane. Obično se koristi za ekspresiju rekombinantnih proteina jer normalno donosi stabilnost eksprimiranih proteina. BL21 je koristan za ekspresiju proteina s pCold I-IV DNA i pCold TF DNA. Ali ova kompetentna stanica E. coli nije namijenjena za sustav ekspresije proteina koji koristi T7 promotor kao što je pET sustav. Razlog tome je što BL21 ne eksprimira T7 RNA polimerazu. Osim toga, ne preporuča se koristiti za konstrukciju ili pripremu plazmida jer nema recA mutaciju.
Slika 01: BL21
BL21 prvi je opisao Studier 1986. nakon raznih modifikacija linije B. BL21 stanicama nedostaje LON proteaza, koja razgrađuje mnoge strane proteine. Nadalje, nedostaje još jedan gen koji kodira proteazu vanjske membrane (OmpT) čija je funkcija razgradnja izvanstaničnih proteina. Nedostatak ovih proteina pokreće uspješnu proizvodnju stranih proteina u stanicama E. coli BL21. Nadalje, hsdSB mutacija u tim stanicama sprječava metilaciju strane DNA i poremećaj u BL21 stanicama.
Što je DH5 Alpha?
DH5 Alpha je genetski modificirana kompetentna stanica E. coli s mutacijom recA1 koja se prvenstveno koristi za transformaciju plazmida. Stanice DH5 Alpha E. coli genetski je modificirao američki biolog Douglas Hanahan kako bi se povećala učinkovitost transformacije. DH5 Alfa stanica ima tri različite mutacije: recA1, endA1 i lacZΔM15. recA1 je jednotočkasta mutacija koja zamjenjuje glicin 160 s ostatkom asparaginske kiseline u polipeptidu recA. Ova mutacija onemogućuje aktivnost rekombinaza i inaktivira homolognu rekombinaciju. endA1 mutacija inaktivira unutarstaničnu endonukleazu koja je sprječava da razgradi umetnuti plazmid.
Slika 02: DH5 Alpha
Štoviše, mutacija lacZΔM15 omogućuje plavo-bijeli pregled transformiranih stanica. Ove stanice su kompetentne stanice. Često se koriste s transformacijom kalcijevog klorida za umetanje željenog plazmida. Nedavnim istraživanjem utvrđeno je da je DH5 Alpha stanica Hanahan metodom najučinkovitija kompetentna stanica za transformaciju plazmida.
Koje su sličnosti između BL21 i DH5 Alpha?
- BL21 i DH5 Alpha dvije su genetski modificirane E.coli
- Oboje su kompetentne stanice.
- Sastoje se od različitih mutacija.
- Obje nemaju prirodno stanište.
- Oni se koriste u laboratorijske svrhe kao što su studije ekspresije i postupci kloniranja.
Koja je razlika između BL21 i DH5 Alpha?
BL21 je genetski modificirana kompetentna stanica E. coli s nedostatkom proteaze koja se prvenstveno koristi za ekspresiju proteina. S druge strane, DH5 Alpha je genetski modificirana kompetentna stanica E. coli s recA1 mutacijom koja se prvenstveno koristi za transformaciju plazmida. Dakle, ovo je ključna razlika između BL21 i DH5 Alpha. Nadalje, stanica BL21 E. coli nema mutaciju recA1, dok stanica DH5 Alpha E. coli ima mutaciju recA1.
Sljedeća infografika prikazuje razlike između BL21 i DH5 Alpha u tabelarnom obliku.
Sažetak – BL21 protiv DH5 Alpha
Nepatogene sojeve E. coli genetski su razvili znanstvenici za laboratorijske studije ekspresije i svrhe kloniranja. BL21 i DH5 Alpha dvije su genetski modificirane stanice E. coli. BL21 se prvenstveno koristi za studije ekspresije proteina. S druge strane, DH5 Alpha prvenstveno se koristi za potrebe transformacije plazmida. Dakle, ovo je sažetak razlike između BL21 i DH5 Alpha.
