Ključna razlika između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije je u tome što je imunoprecipitacija tehnika koja taloži protein iz otopine pomoću specifičnog antitijela, dok je koimunoprecipitacija tehnika koja taloži intaktne komplekse proteina iz otopine pomoću specifičnog antitijela.
Interakcija antigen-antitijelo je specifična kemijska interakcija između antitijela koja proizvode B stanice i antigena (proteina) tijekom imunološke reakcije. Obično se topljivi antigeni spajaju s topljivim antitijelima u prisutnosti elektrolita pri topljivoj temperaturi i pH kako bi se napravio netopljivi vidljivi kompleks. To se naziva reakcija taloženja. Stoga su imunoprecipitacija i koimunoprecipitacija dvije vrste reakcija taloženja koje se rutinski koriste u laboratorijima za identifikaciju proteina kao što su antigeni.
Što je imunoprecipitacija?
Imunoprecipitacija je tehnika taloženja proteina iz otopine pomoću specifičnog antitijela. Ponekad je ova tehnika poznata i kao individualna imunoprecipitacija proteina. Imunoprecipitacija koristi antitijelo za izolaciju odabranog proteina od interesa iz lizata stanica. Antitijelo čisti svoj specifični ciljni protein ili antigen iz mješavine. Antitijelo se veže na protein, a kompleks antitijelo-antigen se izvlači iz uzorka. U eksperimentalnom postavu, kompleks antigen-protutijelo se izvlači pomoću proteina A/G spregnute agaroze ili magnetskih kuglica. Kasnije se kuglice isperu, a protein od interesa se eluira. Pročišćeni protein ili antigen dobiven imunoprecipitacijom provjerava se različitim tehnikama kao što je enzimski imunoanaliza (ELISA) i Western blot (WB).
Slika 01: Imunoprecipitacija
Nadalje, izolirani proteini ili antigeni mogu se kvantificirati i identificirati putem masene spektrometrije korištenjem uzoraka enzimske probave na temelju primarne sekvence. Postoje određena razmatranja prije početka pokusa imunoprecipitacije: odabir formata metode, vezanje proteina i kuglica, odabir pravog primarnog antitijela i izotipa te negativna kontrola.
Što je koimunoprecipitacija?
Koimunoprecipitacija je tehnika taloženja netaknutih proteinskih kompleksa iz otopine pomoću specifičnog antitijela. Koimunoprecipitacija općenito djeluje odabirom specifičnog protutijela koje cilja poznati protein (antigen) za koji se vjeruje da je član većeg kompleksa proteina. Usmjeravanjem poznatog člana specifičnim protutijelom moguće je izvući cijeli kompleks proteina iz otopine. To omogućuje identifikaciju nepoznatih članova kompleksa. Koncept izvlačenja proteinskih kompleksa iz otopine ponekad se naziva "pull-down" mehanizam.
Slika 02: B Koimunoprecipitacija
Koimunoprecipitacija je moćna tehnika koja se koristi za analizu interakcija protein-protein. Glavna svrha koimunoprecipitacije je identifikacija partnera u interakciji kao što su ligandi, kofaktori ili signalne molekule proteinu od interesa. Štoviše, koimunoprecipitacija je učinkovita tehnika koja se koristi za odvajanje proteina iz seruma, staničnog lizata, homogeniziranog tkiva ili kondicioniranog medija.
Koje su sličnosti između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije?
- Imunoprecipitacija i koimunoprecipitacija dvije su vrste tehnika koje se temelje na reakciji taloženja.
- Obje tehnike mogu se koristiti za identifikaciju ciljanog antigena putem specifičnog antitijela.
- Obje tehnike snažno ovise o interakciji antigen-antitijelo.
- Rutinski se koriste u kliničkim laboratorijima.
Koja je razlika između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije?
Imunoprecipitacija je tehnika koja taloži protein iz otopine pomoću specifičnog antitijela, dok je koimunoprecipitacija tehnika koja taloži netaknute komplekse proteina iz otopine pomoću specifičnog antitijela. Dakle, ovo je ključna razlika između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije. Nadalje, imunoprecipitacija se češće koristi u laboratorijima, dok se koimunoprecipitacija ne koristi uobičajeno u laboratorijima.
Infografika u nastavku predstavlja razlike između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije u obliku tablice za usporedbu.
Sažetak – imunoprecipitacija u odnosu na koimunoprecipitaciju
Imunoprecipitacija i koimunoprecipitacija dvije su vrste tehnika koje se temelje na reakciji taloženja koje ovise o interakciji antigen-antitijelo. Tehnika imunoprecipitacije taloži protein iz otopine pomoću specifičnog antitijela, dok tehnika koimunoprecipitacije taloži netaknute komplekse proteina iz otopine pomoću specifičnog antitijela. Dakle, ovo sažima razliku između imunoprecipitacije i koimunoprecipitacije.
