Ključna razlika – RNASE A naspram RNASE H
Ribonukleaze su nukleaze koje specifično razgrađuju RNK u manje jedinice. Mogu se podijeliti u dvije kategorije; endoribonukleaze i egzoribonukleaze. Endoribonukleaza je endonukleaza koja može razgraditi jednolančanu ili dvolančanu RNK. On cijepa fosfodiesterske veze unutar RNA polinukleotidnog lanca. Primjeri su RNaza A, RNaza III, RNaza T1, RNaza P i RNaza H. Exoribonukleaza je egzonukleaza koja razgrađuje RNK uklanjanjem terminalnih nukleotida s 5’-kraja ili 3’-kraja molekule RNK. Primjeri su RNaza R, RNaza II, RNaza D i RNaza PH. Ključna razlika između RNASE A i RNASE H je u tome što je RNase A pankreasna ribonukleaza koja specifično razgrađuje jednolančanu RNA u manje komponente, dok je RNase H nespecifični enzim koji cijepa RNA u hibridu RNA-DNA u manje jedinice putem hidrolitički mehanizam.
Što je RNASE A?
RNAza A je pankreasna ribonukleaza koja specifično cijepa nesparene ostatke citozina i uracila na 3’ kraju jednolančane RNK. RNaza H djeluje pri višoj koncentraciji soli (0,3 M ili viša koncentracija NaCl). Hidrolitička reakcija sastoji se od dva koraka. Formira 3’ fosforilirani produkt preko 2’, 3’ cikličkog monofosfatnog intermedijera. Iako je specifičan za jednolančanu RNA pri višoj koncentraciji soli, također može razgraditi dvolančanu RNA i RNA u hibridu RNA-DNA pri nižoj koncentraciji NaCl (niže od 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield prvi je sintetizirao ovaj enzim. RNaza A je vrlo popularan enzim u molekularnim istraživanjima. RNaza A goveđe gušterače je primjer RNaze A. I jedan je od najotpornijih enzima koji se koriste u laboratoriju. Ovaj enzim ne treba kofaktor za svoju aktivnost. Vrlo je termostabilan enzim. RNaza A je prvi enzim i treći protein kojemu je detektirana ispravna sekvenca aminokiselina. Ovaj enzim je vrlo malen sa 124 aminokiseline i molekularnom masom od 12600da. I ima četiri histidinska ostatka (His 12 i His 119 koji sudjeluju u katalitičkoj reakciji).
Slika 01: RNaza A
RNase A može se izolirati kuhanjem sirovog uzorka. Kada prokuha, svi drugi enzimi razgrađuju preostalu RNazu A. RNaza A je nevjerojatno stabilan enzim. Ovaj enzim inhibira s proteinskim inhibitorima ribonukleaze, kompleksima teških metala i uridin vanadata.
Što je RNaza H?
RNAza H je nespecifični enzim ribonukleaza koji može razgraditi RNK u hibridu RNK-DNK hidrolitičkom reakcijom. RNaza H cijepa 3’- O-P vezu RNK u hibridu RNK-DNK. U konačnici proizvodi proizvode s 3’OH i 5’ fosfatnim završetkom. U replikaciji DNA igra ključnu ulogu uklanjanjem RNA početnice nakon što se formiraju novi DNA lanci. U laboratorijskim uvjetima specifično razgrađuje RNA u RNA-DNA hibridu, ali ne i DNA i nehibridiziranu RNA. I ovaj se enzim obično koristi za uništavanje RNA predloška nakon što se formira prvi komplementarni lanac DNA tijekom sinteze cDNA.
Slika 02: RNaza H
RNase H također se koristi u analizama zaštite od nukleaze. Također se može uključiti u uklanjanje poli A repa iz mRNA. RNaza H ima sposobnost uništavanja nekodirajuće RNK unutar i izvan stanice. Metalni ioni su potrebni kao kofaktori za ovu proteinsku aktivnost. Kelator (EDTA) se može koristiti za inhibiciju enzima RNaze H.
Koje su sličnosti između RNASE A i RNASE H?
- Obje su po prirodi proteini.
- Oboje su endoribonukleaze
- Oboje mogu razgraditi RNA.
- Oboje izvode hidrolitičke reakcije.
- Molekularni laboratoriji koriste oboje.
Koja je razlika između RNASE A i RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNaza A je pankreasna ribonukleaza koja specifično cijepa 3’ kraj nesparenih citozinskih i uracilnih ostataka jednolančane RNA pri višoj koncentraciji soli. | RNase H je nespecifični enzim ribonukleaza koji može razgraditi RNA u RNA-DNA hibridu putem hidrolitičke reakcije. |
| Priroda cijepanja RNK | |
| RNase A specifično cijepa jednolančanu RNA pri višoj koncentraciji soli. | RNase H cijepa RNA u RNA-DNA hibridu. |
| Potreba za kofaktorima za aktivnost | |
| RNase A ne treba kofaktore za svoju aktivnost. | RNase H treba metalne ione kao kofaktore za svoju aktivnost. |
| Inhibitori aktivnosti proteina | |
| Proteinski inhibitori ribonukleaze, kompleksi teških metala i uridin vanadata inhibiraju aktivnost RNAse A. | Kelator (EDTA) inhibira aktivnost RNaze H. |
| Uklanjanje RNA primera u replikaciji DNA | |
| RNase A ne koristi se za uklanjanje RNA primera u replikaciji DNA. | RNase H koristi se za uklanjanje RNA primera u replikaciji DNA |
| Uklanjanje šablona DNK u komplementarnoj sintezi DNK (C-DNK) | |
| RNase A ne koristi se za uklanjanje RNA predloška tijekom komplementarne sinteze DNA (C-DNA). | RNase H koristi se za uklanjanje RNA predloška tijekom komplementarne sinteze DNA (C-DNA). |
| Uklanjanje Poly-A-Tail u mRNA hibridiziranoj u Oligo (dt) | |
| RNaza A ne koristi se za uklanjanje "poli-A repa" u mRNA hibridiziranoj u oligo (dt). | RNaza H koristi se za uklanjanje "poli-A repa" u mRNA hibridiziranoj u oligo (dt) |
Sažetak – RNASE A protiv RNASE H
Ribonukleaze su enzimi nukleaze koji imaju sposobnost cijepati RNK u manje jedinice. Dvije su vrste; endoribonukleaze i egzoribonukleaze. Endoribonukleaza je endonukleaza koja ima sposobnost razgradnje jednolančane ili dvolančane RNK. I cijepa fosfodiestersku vezu unutar RNA polinukleotidnog lanca. RNaza A i RNaza H su dvije endoribonukleaze. RNaza A je pankreasna ribonukleaza koja specifično cijepa nesparene ostatke citozina i uracila na 3’ kraju jednolančane RNA pri višoj koncentraciji soli. RNaza H je nespecifični enzim ribonukleaza koji može razgraditi RNK u hibridu RNK-DNK hidrolitičkom reakcijom. Ovo je razlika između RNaze A i RNaze H.
Preuzmite PDF RNASE A protiv RNASE H
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti ga za izvanmrežne svrhe prema napomeni o citatu. Ovdje preuzmite PDF verziju Razlika između RNASE A i RNASE H
